HSP70入核與PARP-1結(jié)合在肝缺血再灌注損傷中的保護(hù)作用.pdf

1、目的:
　　通過建立大鼠熱休克及肝臟缺血再灌注模型，研究 HSP70進(jìn)入細(xì)胞核與PARP-1結(jié)合，在大鼠肝臟缺血再灌注損傷中的保護(hù)作用。
　　方法:
　　選擇健康的雄性Sprague Dawley(SD)大鼠，體重在180g-250g之間，隨機(jī)分為5組：HSP70抑制組（H-/P+組），通過槲皮素抑制HSP70的高表達(dá)；陰性對(duì)照組（NC組）；熱休克組（H+/P+組），通過熱休克促進(jìn)HSP70的高表達(dá)；陽性對(duì)照組（PC組

2、）即肝臟缺血再灌注組，Pringle法建立肝臟缺血再灌注模型；PARP-1抑制組（H+/P-組），通過3-AB抑制PARP-1的表達(dá)。各組造模成功后取肝臟組織及血液樣本，分析各組大鼠血生化指標(biāo)改變，Western blot分析HSP70與PARP-1的表達(dá)情況，免疫共沉淀分析HSP70與PARP-1的結(jié)合情況，肝臟標(biāo)本HE染色觀察組織形態(tài)學(xué)改變。結(jié)果采用專業(yè)圖像分析軟件進(jìn)行分析，用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:

3、r>　　1.用自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清學(xué)標(biāo)本，統(tǒng)計(jì)軟件分析結(jié)果示各個(gè)組相互比較均有顯著性差異，P<0.01，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PC組血清 ALT值最高，與其余各組比較有顯著性差異，P<0.01；H+/P+組與H-/P+組、H+/P-組比較有顯著性差異，P<0.01，血清ALT值較低；H-/P+組與H+/P-組比較血清ALT值高，有顯著性差異，P<0.01；表明細(xì)胞核中HSP70與PARP-1均可發(fā)揮肝功能保護(hù)作用，HSP70對(duì)肝功能的保護(hù)作用強(qiáng)于

4、PARP-1。
　　2.通過提取細(xì)胞核中HSP70行Westren blot檢測(cè)，證實(shí)HSP70進(jìn)入細(xì)胞核中，且明確了各處理組中 HSP70的表達(dá)情況。統(tǒng)計(jì)分析示：H+/P+組與H+/P-組比較無顯著性差異，P>0.05；H-/P+組與PC組比較無顯著性差異，P>0.05；H+/P+組、H+/P-組與其他組比較，Hsp70的表達(dá)增高，有顯著性差異，P<0.01；NC組與其余組比較均有顯著性差異，P<0.01，只有少量Hsp70的表

5、達(dá)；表明熱應(yīng)激、缺血再灌注損傷均可促進(jìn)HSP70表達(dá)，槲皮素起到了抑制HSP70的表達(dá)。
　　3.提取細(xì)胞核中PARP-1行Westren blot檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)分析各組PARP-1表達(dá)情況：H+/P+與其余組比較有顯著性差異，P<0.01，表達(dá)明顯增多；H-/P+組與PC組、NC組及H+/P-比較有顯著性差異，P<0.01，PARP-1表達(dá)增多；H+/P-組與PC組、NC組比較PARP-1表達(dá)量多，有顯著性差異，P<0.01；PC組

6、與NC組比較有顯著性差異，P<0.01；表明熱休克及缺血再灌注損傷均促使細(xì)胞核PARP-1的表達(dá)，3-AB達(dá)到了抑制PARP-1的過表達(dá)。
　　4.免疫共沉淀檢測(cè)：提取各組大鼠肝臟細(xì)胞核蛋白，分別用PARP-1、HSP70抗體免疫沉淀，再行Western blot分析，結(jié)果示：在70kDa和29kDa處各出現(xiàn)一條帶，為HSP70和PARP-1蛋白，證實(shí)了細(xì)胞核中HSP70與PARP-1復(fù)合物的存在。表明了在熱休克及缺血再灌注損傷等

7、應(yīng)激時(shí)，HSP70進(jìn)入細(xì)胞核中與PARP-1結(jié)合。
　　5.HE染色結(jié)果顯示：NC組（空白對(duì)照組）肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常，肝小葉中央靜脈、肝竇結(jié)構(gòu)清晰可見，匯管區(qū)無明顯的中性粒細(xì)胞浸潤，肝竇無明顯淤血；PC組（缺血再灌注組）肝細(xì)胞明顯腫脹，肝竇狹窄、淤血，肝小葉中央靜脈淤血，肝細(xì)胞索及肝竇分界不清，匯管區(qū)見中性粒細(xì)胞浸潤；H-/P+組（HSP70抑制組）、H+/P-組（PARP-1抑制組）及H+/P+（熱休克組）肝細(xì)胞損傷病理改變介于