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文檔簡介
1、自從第一代喹諾酮類藥物-萘啶酸-出現(xiàn)以來,作為一種廣譜抗生素,喹諾酮類藥物被廣泛應用于治療人類及動物病原微生物引起的疾病,由此帶來的耐藥問題也日益嚴重。幾十年過去了,科學家仍在不斷地研究開發(fā)新的藥物以應對這類抗生素的抗性問題。但是好像在這場“戰(zhàn)爭”中,細菌總是取得勝利的一方。迄今為止,發(fā)現(xiàn)了兩種喹諾酮抗性機制,他們分別由染色體及質(zhì)粒介導。其中染色體介導的藥物靶蛋白的突變被認為是主要的抗性機制。1998年首次發(fā)現(xiàn)了質(zhì)粒介導的喹諾酮抗性(P
2、MQR)基因,稱之為qnrA基因。隨后,世界各地的科學家發(fā)現(xiàn)了其他四種qnr基因,除了Qnr蛋白外,還有兩個額外的PMQR機制,氨基糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶的變體Aac(6')-Ib-cr及外排泵QepA。這些機制雖然只能賦予細菌低水平的抗性,但是可以水平轉(zhuǎn)移擴散,并促進高水平的抗性產(chǎn)生。因此研究PMQR基因在環(huán)境中的分布及傳播情況意義重大。本實驗主要研究了濟南地區(qū)水環(huán)境中細菌的耐藥情況及質(zhì)粒介導的喹諾酮抗性基因的分布,評估抗生素污染對生態(tài)環(huán)境造
3、成的影響。
我們從濟南地區(qū)醫(yī)院廢水、城市污水處理廠廢水和小清河中提取總基因組,通過熒光定量PCR的方法對其中的qnrA基因及16SrRNA基因進行定量,分析qnrA基因的分布情況。qnrA基因的含量由多到少依次為醫(yī)院廢水,城市污水處理廠廢水、小清河。研究還顯示qnrA基因的含量與水樣中的細菌含量成正相關(guān)。
同時我們從上述廢水樣品中分離篩選出753株耐藥的革蘭氏陰性菌株,檢測了五種質(zhì)粒介導的喹諾酮抗性基因。得到含有質(zhì)粒
4、介導的喹諾酮抗性基因的菌株371株,占所有篩選菌株的49.26%。其中236株含有qepA基因,119株含aac(6')-Ib-cr基因,118株含有qnrS基因,27株含有qnrA基因和22株含qnrB基因。這753株細菌還進行了Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型整合子的檢測,含有Ⅰ型整合子的有548株,Ⅱ型整合子的有16株。同時含有Ⅰ型和Ⅱ型整合子的細菌有14株。未發(fā)現(xiàn)含有Ⅲ型整合子的細菌。含有整合子的細菌的基因盒檢測共發(fā)現(xiàn)了22種不同的基因盒陣列。
5、r> 為了得到環(huán)境微生物群落結(jié)構(gòu)與質(zhì)粒介導的喹諾酮抗性基因qnrA之間的關(guān)系,我們還采取基于16SrRNA基因的Miseq高通量測序平臺對樣品進行高通量測序,結(jié)果顯示,五個取樣點的物種多樣性水平較為穩(wěn)定,沒有顯著差異性,光大水務站點的豐富度是最高的。在所有樣品中含量都較高的兩種細菌門類是變形菌門(Proteobacteria)和擬桿菌門(Bacteroidetes),在各種污水水體中,較為廣泛存在的菌種有不動桿菌(Acinetobac
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