多重耐藥肺炎克雷伯菌質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮類耐藥基因的檢測(cè)及其與可移動(dòng)遺傳元件的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　1.了解南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院2012年～2013年間臨床分離多重耐藥肺炎克雷伯菌的分布情況及耐藥特性，為臨床抗菌藥物選擇提供依據(jù)。
　　2.研究2012年～2013年多重耐藥肺炎克雷伯菌臨床連續(xù)分離株中質(zhì)粒介導(dǎo)喹諾酮類耐藥基因的分布和特性。
　　3.研究質(zhì)粒介導(dǎo)的氟喹諾酮類耐藥基因與移動(dòng)基因元件攜帶率的相關(guān)性，并分析其與不同抗菌藥物耐藥性的關(guān)系。
　　方法：
　　1.收集南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床

2、標(biāo)本中分離的多重耐藥肺炎克雷伯菌40株，采用最低抑菌濃度（MIC）法測(cè)定抗菌藥物對(duì)細(xì)菌的敏感性，藥敏結(jié)果按照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI）2012推薦標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判讀。
　　2.采用PCR法檢測(cè)質(zhì)粒介導(dǎo)的氟喹諾酮類耐藥基因（PMQR），包括qnr基因、藥物外排泵蛋白qepA和氨基糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶的變異基因aac(6’)-Ib-cr,陽(yáng)性結(jié)果測(cè)序，測(cè)序結(jié)果在Genbank比對(duì)。對(duì)PMQR基因陽(yáng)性菌株進(jìn)行接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)。ERIC-PCR

3、及MLST分析是否克隆傳播。
　　3. PCR擴(kuò)增部分可移動(dòng)遺傳元件遺傳元件（插入序列IS26、IS2、ISCR1、ISEcp1，整合子intI1、intI2、intI3）。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，檢出的陽(yáng)性基因測(cè)序并比對(duì)；PCR-mapping對(duì)移動(dòng)元件下游是否攜帶PMQR基因進(jìn)行檢測(cè)，研究分析它們之間的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1.本研究共收集2012年～2013年多重耐藥肺炎克雷伯菌40株，藥敏結(jié)果顯示耐藥率最高的是氨

4、芐西林，耐藥率為100％；而頭孢唑啉，頭孢他啶，頭孢曲松，氨曲南，厄他培南，慶大霉素的耐藥率為80%～97.5%；亞胺培南的耐藥率為77.5%；耐藥率最低的是左氧氟沙星，但也達(dá)到了55%。ERIC-PCR及MLST結(jié)果顯示，存在多個(gè)克隆株，主要為ST11/A型，但也存在ST340/A型、ST437/A型及ST147/J型等克隆株。
　　2.40株多重耐藥肺炎克雷伯菌中，其中有37株（92.5%）檢測(cè)出含有qnr基因的陽(yáng)性菌株，qn

5、rA共33株，均為qnrA1型；qnrB共12株，均為qnrB4型；qnrS共16株，均為qnrS1型，并且有4株同時(shí)攜帶三種以上qnr基因，qnrC、qnrD和qepA基因本次實(shí)驗(yàn)均未檢出，另外檢測(cè)出含aac(6’)-Ib基因28株，測(cè)序比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)12株為aac(6’)-Ib-cr基因；40株P(guān)MQR基因陽(yáng)性菌株中，接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)成功8株，接合子與受體菌相比，對(duì)氟喹諾酮類藥物的MIC值提高了2～32倍，部分或全部qnr基因轉(zhuǎn)移到接合子

6、上。
　　3.40株肺炎克雷伯菌中，檢出ISCR1基因陽(yáng)性30株，檢出ISEcp1基因陽(yáng)性40株，整合子intl1陽(yáng)性32株，檢出IS2基因陽(yáng)性16株，檢出IS26基因陽(yáng)性10株；PCR-mappin擴(kuò)增及序列分析ISCR1連接qnrA1共15株，ISCR1連接qnrB4有共2株，ISCR1連接qnrS1共4株；ISEcp1連接qnrB4共9株，ISEcp1連接qnrA1共4株，ISEcp1連接qnrS1共1株；IS2連接qnrS

7、1共8株。
　　結(jié)論：
　　1.臨床分離的40株肺炎克雷伯菌株耐藥嚴(yán)重，對(duì)多種臨床常用的抗菌藥物耐藥率達(dá)55%以上，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)肺炎克雷伯菌的耐藥監(jiān)測(cè)，并規(guī)范臨床抗菌藥物的使用。
　　2.本院肺炎克雷伯菌PMQR基因以qnr基因?yàn)橹?，其次是aac(6’)-Ibr基因，qnr基因以qnrA為主，其次是qnrS和qnrB，亞型包括qnrA1、qnrB4、qnrS1和aac(6’)-Ib-cr，未檢出qnrC、qnrD和qepA