肺炎克雷伯菌質(zhì)粒介導(dǎo)AmpCβ-內(nèi)酰胺酶耐藥基因研究.pdf

1、目的：了解湖南地區(qū)中南大學(xué)三所附屬醫(yī)院(湘雅醫(yī)院、湘雅二醫(yī)院、湘雅三醫(yī)院)肺炎克雷伯菌中質(zhì)粒介導(dǎo)AmpCβ-內(nèi)酰胺酶的檢出情況,確定其基因型,進(jìn)行流行病學(xué)分析,了解產(chǎn)質(zhì)粒介導(dǎo)AmpCβ-內(nèi)酰胺酶菌株的耐藥性,為臨床治療提供參考。
　　 方法：收集中南大學(xué)三所附屬醫(yī)院2004年10月至2005年7月間非重復(fù)肺炎克雷伯菌110株,保存于脫脂牛奶管中,放置于-70℃冰箱。所有菌株采用法國(guó)生物梅里埃公司的全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)VITEK-

2、2的GN卡鑒定和AST GN-13卡進(jìn)行藥敏分析。采用頭孢西丁紙片試驗(yàn)對(duì)110株非重復(fù)肺炎克雷伯菌進(jìn)行AmpC酶初篩,提取初篩陽(yáng)性菌株的質(zhì)粒,以其為模板采用多重PCR法進(jìn)行blaMOX、blaCIT、blaDHA、blaACC、blaEBC、blaFOX型基因擴(kuò)增,用特異性引物對(duì)陽(yáng)性菌株進(jìn)行相應(yīng)基因整個(gè)開(kāi)放閱讀框PCR擴(kuò)增,將特異性PCR擴(kuò)增的DNA產(chǎn)物純化后進(jìn)行測(cè)序分析,通過(guò)BLAST將測(cè)序結(jié)果與基因庫(kù)已知序列進(jìn)行對(duì)比分析,確定其基因

3、型。對(duì)證實(shí)攜帶質(zhì)粒AmpC酶的菌株采用腸桿菌科基因組內(nèi)重復(fù)一致序列聚合酶鏈反應(yīng)(ERIC-PCR)進(jìn)行菌株DNA的同源性分析。
　　 結(jié)果：從110株臨床分離的非重復(fù)肺炎克雷伯菌中共檢出對(duì)頭孢西丁不敏感菌24株。提取其質(zhì)粒作為模板,經(jīng)多重PCR擴(kuò)增24株肺炎克雷伯菌中有21株獲得陽(yáng)性結(jié)果,均攜帶DHA型質(zhì)粒AmpC酶基因。以特異性DHA引物進(jìn)一步擴(kuò)增及測(cè)序,經(jīng)GenBank網(wǎng)上同源性比較,本次試驗(yàn)菌株所攜帶的質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶耐

4、藥基因全部為DHA-1型耐藥基因。對(duì)攜帶DHA型耐藥基因的菌株進(jìn)行ERIC-PCR流行病學(xué)分型,21株肺炎克雷伯菌ERIC-PCR圖譜可分為6種克隆類(lèi)型,結(jié)果顯示在一些肺炎克雷伯菌中存在ERIC-PCR圖譜類(lèi)型的高度一致性。藥敏檢測(cè)結(jié)果顯示產(chǎn)質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶的肺炎克雷伯菌對(duì)大多數(shù)新型廣譜β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物耐藥,對(duì)亞胺培南敏感。
　　 結(jié)論：(1)湖南地區(qū)臨床分離的肺炎克雷伯菌中已經(jīng)出現(xiàn)質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶菌株,基因型以DHA-1型

5、為主。加強(qiáng)對(duì)肺炎克雷伯菌產(chǎn)質(zhì)粒介導(dǎo)AmpCβ-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè),對(duì)控制質(zhì)粒AmpC酶?jìng)鞑ゾ哂兄卮蟮囊饬x。(2)在一定程度上DHA-1型質(zhì)粒介導(dǎo)的AmpCβ-內(nèi)酰胺酶存在克隆傳播,其耐藥性除了通過(guò)質(zhì)粒傳播外還能夠水平傳播,給臨床抗感染治療帶來(lái)重大威脅。(3)對(duì)產(chǎn)AmpC酶菌引起感染的治療,應(yīng)根據(jù)細(xì)菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果,合理選擇有效的抗菌藥物治療。產(chǎn)質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶的肺炎克雷伯菌對(duì)大多數(shù)新型廣譜β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素耐藥,碳青霉烯類(lèi)和第四代頭孢菌素可