抗前列腺癌靶向藥物PSA抗體偶聯(lián)愛普列特的研制與藥效學(xué)研究.pdf

1、前列腺疾病困擾著全世界的中老年男性。前列腺疾病包括:前列腺癌、前列腺增生、前列腺炎。前列腺癌可以分為激素依賴型和激素非依賴性，以前者居多。5α還原酶抑制劑主要用于抑制睪酮轉(zhuǎn)化為二氫睪酮，二氫睪酮與雄激素受體的結(jié)合力比睪酮強4-5倍，強烈刺激前列腺增生。5α還原酶抑制劑對于前列腺增生的治療，療效明確。一般認為，5α還原酶抑制劑也可降低前列腺癌的發(fā)生率。
　　5α還原酶抑制劑包括非那雄胺、愛普列特和度他雄胺。其中愛普列特是我國自行研制

2、并擁有完全知識產(chǎn)權(quán)的國家一類新藥，由江蘇聯(lián)環(huán)藥業(yè)股份有限公司獨家生產(chǎn)。我們利用愛普列特與PSA（前列腺特異性抗原）抗體偶聯(lián)研制了一種抗前列腺癌的靶向藥物，以實現(xiàn)靶向增效、并驗證靶向藥物對前列腺癌的治療作用。
　　靶向藥物（targeting drug delivery system）是通過適當(dāng)?shù)妮d體使藥物選擇性的濃集于需要發(fā)揮作用的靶器官、靶組織、靶細胞或細胞內(nèi)某靶點的給藥系統(tǒng)。靶向藥物可使藥物集中于靶點，同時減少在產(chǎn)生不良反應(yīng)部

3、位的濃度。靶向藥物可分為主動靶向和被動靶向藥物，以及物理化學(xué)靶向藥物三種。抗體對大多數(shù)腫瘤的特異性抗原具有識別作用，抗體介導(dǎo)的主動靶向藥物是把藥物與抗體結(jié)合，利用抗體與配體特異性結(jié)合而將藥物導(dǎo)向特定的組織和器官。主動靶向藥物通過選擇性地作用于腫瘤細胞、減少了對正常細胞的毒性。主動靶向藥物集中于靶區(qū)可減少用藥劑量，提高療效，同時減少藥物的毒副作用。
　　本文旨在研制抗前列腺癌的抗體偶聯(lián)藥物，用前列腺癌相關(guān)的PSA為靶點，將PSA的抗

4、體與愛普列特相偶聯(lián)，得到主動靶向藥物。愛普列特結(jié)構(gòu)上有一個游離的羧基，而抗體分子表面有賴氨酸ε-氨基，數(shù)量在20～50之間，可以利用羧基與氨基形成酰胺鍵，從而實現(xiàn)抗體與小分子藥物的偶聯(lián)。羧基事先需要碳二亞胺試劑活化，再與NHSS生成活性酯，在弱堿性條件下與氨基縮合生成酰胺鍵，經(jīng)排阻層析去除小分子未反應(yīng)的雜質(zhì)，冷凍干燥除去水分后即得。
　　經(jīng)質(zhì)譜檢測，生成的愛普列特與PSA抗體偶聯(lián)物分子量較抗體增加了8000da。愛普列特與PSA抗

5、體偶聯(lián)物經(jīng)10％醋酸水解，用BCA法測定蛋白質(zhì)含量，液相色譜法測定藥物的含量，根據(jù)抗體和愛普列特的分子量計算平均偶聯(lián)率。由水解產(chǎn)物與愛普列特原料水解產(chǎn)物在液相色譜上出峰位置一致，可證明偶聯(lián)反應(yīng)未對愛普列特的結(jié)構(gòu)產(chǎn)生破壞。
　　此外，偶聯(lián)產(chǎn)物在體外的抗原抗體結(jié)合力試驗中證明仍有70％的結(jié)合力。在體外細胞毒性試驗中，愛普列特與PSA抗體偶聯(lián)產(chǎn)物對LNCaP細胞的毒性(IC50)較PC-3細胞的毒性(IC50)增大，表現(xiàn)出一定的選擇性。

6、在裸鼠皮下瘤動物模型體內(nèi)注射靶向藥物后，切除腫瘤和腿部肌肉，制作切片，免疫組化實際處理，結(jié)果表明，抗體偶聯(lián)藥物在腫瘤組織內(nèi)的濃度比肌肉中的濃度高得多，經(jīng)圖像灰度分析，濃度差在10倍以上。進一步的定量分析，證明了愛普列特在裸鼠皮下瘤動物模型體內(nèi)的靶向性分布。抑瘤試驗中，尾靜脈注射愛普列特與PSA抗體偶聯(lián)物0.1mg(相當(dāng)于愛普列特0.02mg)，每三天給藥一次，兩月后平均瘤體積330mm3，空白對照組平均瘤體積475mm3，同劑量愛普列特