綠盲蝽AOX、ATF和DES基因的克隆與功能分析.pdf

1、綠盲蝽(Apolygus lucorum)是我國危害棉花的盲蝽蟓優(yōu)勢種之一，目前主要依賴化學防治，研究綠盲蝽體內(nèi)重要基因的功能，對探尋綠色安全的防治措施具有重要意義。盲蝽性信息成分主要為短碳鏈的醛和酯組成，前人研究報道醇氧化酶(alcoholoxidase，AOX)、乙?；D(zhuǎn)移酶(acetyltransferase，ATF)和去飽和酶（desaturase，DES）是醛和酯類物質(zhì)的合成過程中的重要酶類，但它們在綠盲蝽中的功能并不清楚，因

2、此本文開展了這三類基因在綠盲蝽體內(nèi)的功能研究。
　　RNA注射干擾是本文基因功能研究的重要手段，我們首先研究了RNA注射干擾綠盲蝽的最佳注射體積，結(jié)果表明羽化第一天的綠盲蝽成蟲的最佳注射體積為100nL。
　　本研究采用熒光定量PCR研究了8個ATF基因，2個AOX和1個DES基因在性信息素釋放高峰期和未成熟雌雄蟲臭腺中的表達差異，結(jié)果表明ATF基因NAA25在3齡綠盲蝽雌蟲臭腺中特異性表達的特異性高表達，因此NAA25可能

3、與綠盲蝽性信息素合成相關(guān)。
　　本研究采用顯微注射法對綠盲蝽的ATF基因NAA25、NAA20和NAA15進行了干擾，其中干擾NAA25后，性成熟綠盲蝽雌蟲體內(nèi)成熟卵子數(shù)量降低了87.1％(p＜0.005)，干擾NAA20后，性成熟綠盲蝽雌蟲體內(nèi)成熟卵子數(shù)量降低了95.6％(p＜0.005)，干擾NAA15后，性成熟綠盲蝽雌蟲體內(nèi)成熟卵子數(shù)量降低了98.8％(p＜0.005)。利用實時熒光定量檢測了這3個基因從羽化笫一天到性成熟時

4、在全蟲中的表達量，這3個基因均在羽化第一天和性成熟前一天高表達，由此我們推測這3個基因在卵巢發(fā)育中起著重要的功能。
　　在本研究中，我們通過RACE技術(shù)獲得2個N-alpha-acetyltransferase(NAA)基因的全長。其中N-alpha-acetyltransferase25(NAA25)屬于NatB復合酶的非催化亞基，N-alpha-acetyltransferase15(NAA15)屬于NatA復合酶的輔助亞基。