有氧運動對小鼠創(chuàng)面愈合過程脾臟免疫功能及創(chuàng)面VEGF的影響.pdf

1、目的：
　　創(chuàng)傷的創(chuàng)面愈合是一個非常復(fù)雜而又十分有序的過程，當(dāng)中有許多細(xì)胞參與，在細(xì)胞增殖的同時又分泌多種因子和基質(zhì)。在免疫細(xì)胞、生長因子對創(chuàng)面愈合影響方面臨床研究較多，主要是采用藥物干預(yù)，而在有氧運動干預(yù)方面，國內(nèi)外在此方面研究較少。
　　長期適量的有氧運動能強身健體，提高心肺功能，這是普遍的共識。本研究試圖通過對正常小鼠以及免疫抑制模型小鼠受傷后的有氧運動干預(yù)，探討有氧運動干預(yù)對創(chuàng)面愈合時脾臟介導(dǎo)的免疫功能及VEGF表達

2、的影響，揭示有氧運動干預(yù)對創(chuàng)面愈合影響的分子及免疫機制，為有氧運動療法在臨床中的應(yīng)用提供實驗參考。
　　方法：
　　本研究選擇SPF級8周齡70只健康昆明小鼠為實驗對象，小鼠全部為雄性。小鼠按體重分層被隨機分為四組：A組（創(chuàng)傷+運動）、B組（創(chuàng)傷+安靜）、C組（免疫抑制+創(chuàng)傷+運動）、D組（免疫抑制+創(chuàng)傷+安靜）。小鼠常規(guī)飼養(yǎng)適應(yīng)環(huán)境3天后，C、D組腹腔注射氫化可的松0.5mg/天、連續(xù)注射7天造成免疫抑制模型。A、B、C、

3、D組進行轉(zhuǎn)輪式疲勞儀運動適應(yīng)3天后，參照付小兵等創(chuàng)面造模方法進行創(chuàng)傷造模。造模后第二天開始進行有氧運動干預(yù)。有氧運動干預(yù)參照K.Todd Keylock等的方法，采用小鼠轉(zhuǎn)籠運動。以15r/min，20min/次/天，持續(xù)10天實施有氧運動干預(yù)。在創(chuàng)傷后第1天、第3天、第6天、第9天對創(chuàng)面進行透明膜描記和拍照，用圖像分析軟件計算創(chuàng)面愈合速率。分別在傷后第3、6、9日運動后3小時末取材，傷后第3天為第一次取材，每組處死5只，傷后第6天為第

4、二次取材，每組處死6只，傷后第9天為第三次取材，每組處死6只。無菌摘取脾臟和胸腺分別稱重計算脾臟系數(shù)（SC）與胸腺系數(shù)(TC)。MTT法測定脾B淋巴細(xì)胞增殖能力(SB)和脾T淋巴細(xì)胞增殖能力(ST)。取肉芽組織采用免疫組化法測VEGF表達。
　　結(jié)果：
　　注射氫化可的松7天后，C、D組小鼠出現(xiàn)萎靡不振、毛色無光澤、弓背少動，眼睜不開，有畏寒蜷臥，反應(yīng)遲鈍，體重下降等現(xiàn)象。創(chuàng)傷造模后以上情況加劇，兩組各有一只死亡。經(jīng)過血液白

5、細(xì)胞技術(shù)檢測，C、D組白細(xì)胞數(shù)量顯著低于正常組A、B組，綜上判斷小鼠氫化可的松免疫抑制模型建立成功。
　　HE染色結(jié)果，B、D組傷后第3天傷口有大量炎性細(xì)胞浸潤，傷后第6天僅表現(xiàn)為部分組織開始修復(fù)，周邊炎性細(xì)胞浸潤；A、C組小鼠創(chuàng)面炎癥細(xì)胞較稀疏，創(chuàng)面膠原較少，傷后第9天染色觀察大部分組織開始修復(fù)。A、C組能夠盡快抑制創(chuàng)傷早期的滲出及炎性反應(yīng)、促進肉芽組織修復(fù)性增生；而A組在在創(chuàng)傷修復(fù)中期能夠更好的促使肉芽組織修復(fù)，肉芽組織相對致

6、密、均勻。
　　四組在傷后第3天都表現(xiàn)出較高的白細(xì)胞水平。隨著運動天數(shù)的增加，運動組白細(xì)胞下降幅度顯著大于安靜組（A＞B，C＞D）。說明傷后適量運動可以加速炎癥消除，從而提高機體抗損傷水平。這與Keylock研究結(jié)果一致。
　　隨著傷后有氧運動天數(shù)的增加，運動組脾臟系數(shù)與胸腺系數(shù)上升均顯著大于安靜組（A＞B，C＞D）；表明有氧運動提高免疫抑制小鼠機體免疫力。
　　經(jīng)過九天傷后有氧運動，A、C組小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞對刀豆蛋

7、白A(ConA)誘導(dǎo)增殖能力與脾臟B淋巴細(xì)胞對LPS誘導(dǎo)增殖能力顯著高于B、D組顯著高于B、D組（P＜0.01）。說明運動組小鼠的脾臟T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的機能活躍程度高于對照組小鼠，結(jié)果提示，有氧運動可能有助于增強脾臟T淋巴細(xì)胞與脾臟B淋巴細(xì)胞的功能。
　　免疫組化結(jié)果顯示，在皮膚創(chuàng)傷修復(fù)過程的早期（D3）VEGF的表達A、C組呈陽性，B、D組呈弱陽性。在造創(chuàng)6天后（D6），A、C組VEGF的表達同時達到峰值，B、D組VEGF

8、的表達為陽性，這與創(chuàng)傷愈合過程中新生血管形成的時間相似。創(chuàng)傷修復(fù)晚期（D9），A、C組肉芽組織增生已達頂峰，開始逐漸聚攏為團狀，此時VEGF的表達為強陽性，而B、D組VEGF的表達與D6相比差異不大。顯示VEGF在創(chuàng)傷修復(fù)中發(fā)揮著重要作用。內(nèi)皮生長因子發(fā)揮其強大的促細(xì)胞增殖功能，激活了運動過程中的毛細(xì)血管新生的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
　　以上實驗結(jié)果說明，傷后適量有氧運動能提高小鼠免疫應(yīng)激能力和免疫功能，促進創(chuàng)面愈合速率，這與創(chuàng)面愈合速率

9、結(jié)果相一致。
　　結(jié)論：
　　1、傷后有氧運動降低創(chuàng)傷小鼠白細(xì)胞水平，加速炎癥消除，提高機體抗損傷水平。
　　2、傷后有氧運動使免疫抑制復(fù)合皮膚創(chuàng)傷小鼠脾臟系數(shù)、胸腺系數(shù)均得到適量提升，脾臟T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞增殖能力得到顯著上升，從而增強免疫抑制小鼠脾臟介導(dǎo)的免疫功能。
　　3、傷后有氧運動對免疫抑制復(fù)合皮膚創(chuàng)傷小鼠創(chuàng)面VEGF的表達有明顯影響。
　　綜上，傷后有氧運動增強創(chuàng)傷小鼠傷后免疫應(yīng)激能力，提升