MtDNA導(dǎo)致SIRS的機制及氯喹與PDTC對SIRS保護效應(yīng)的初步探討.pdf

1、目的：創(chuàng)傷導(dǎo)致機體出現(xiàn)全身炎癥反應(yīng)綜合征,甚至發(fā)生多器官功能衰竭。全身炎癥反應(yīng)綜合征的發(fā)病機制及防治至今仍未完全了解。現(xiàn)已知創(chuàng)傷后機體可產(chǎn)生大量的mtDNA,而mtDNA可激活P38蛋白激酶通路產(chǎn)生炎癥因子,導(dǎo)致全身炎癥綜合征,但是mtDNA否能通過TLR-9激活NF-κB通路并產(chǎn)生炎癥因子依然未知。本文采用體內(nèi)試驗,首先注射不同濃度MtDNA,檢測外周血各種炎癥因子的水平變化,觀察肺臟炎性浸潤情況,探討mtDNA導(dǎo)致SIRS的機制;在

2、此基礎(chǔ)上以氯喹與PDTC為阻滯劑,初步了解氯喹與PDTC對于mtDNA導(dǎo)致SIRS的保護效應(yīng),為嚴重創(chuàng)傷救治中降低SIRS發(fā)生,防治多器官損傷及相關(guān)并發(fā)癥提供新思路。
　　方法：第一部分將大鼠分為8組;①緩沖液組(n=2)②nDNA(10ug/ml)組(n=14)③mtDNA(15ug/ml)組(n=14)④線粒體碎片(終濃度含mtDNA1μg/ml,MTD1)組(n=14)⑤mtDNA(5ug/ml)組(n=14)⑥線粒體碎片(

3、終濃度含mtDNA5μg/ml,MTD5)組(n=14)⑦mtDNA(15ug/ml)組(n=14)⑧線粒體碎片(終濃度含mtDNA15μg/ml,MTD15)組(n=14)。第二部分將大鼠分為4組:①mtDNA(15ug/ml)+氯喹(10mg/kg)組(n=14)②mtDNA(15ug/ml)+氯喹(30mg/kg)組(n=14)③mtDNA(15ug/ml)+PDTC(30mg/kg)組(n=14)④mtDNA(15ug/ml)+

4、PDTC(120mg/kg)組(n=14)。兩部分分別在1小時、2小時、4小時、8小時、12小時、24小時和48小時,利用多通道生理檢測儀檢查大鼠生命體征變化;用酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA)觀測外周血中TNF-α、IL-10、IL-6、的表達水平;用實時定量PCR(Real-time PCR)檢測肺組織中NF-κB亞單位p65mRNA、I-κBmRNA、TLR9mRNA的表達;熒光定量PCR檢測外周血中mtDNA的水平;HE染色觀察

5、肝、肺、腎、腸的病理學(xué)變化。實驗資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(x±s)表示。所有數(shù)據(jù)運用SPSS17.0統(tǒng)計軟件采用單因素方差分析(one way ANoVA)及回歸與相關(guān)分析,P<0.05為差異有顯著性。
　　結(jié)果：
　　1.各組之間的大鼠血壓與呼吸沒有明顯變化,各實驗組在不同時間點體溫明顯變化,但各組之間的體溫變化沒有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2.注射緩沖液大鼠和nDNA的大鼠在各個時間點外周血炎癥因子水平未見明顯變化;線粒體碎片

6、和mtDNA組在1小時炎癥因子水平開始升高,8小時到達高峰,隨著注射線粒體碎片和mtDNA濃度升高,炎癥水平越高,且含相應(yīng)mtDNA濃度的線粒體碎片比這種濃度的mtDNA炎癥因子水平高。
　　3.p65mRNA、I-κBmRNA在肺組織中的表達水平和炎癥因子、TLR9的表達水平升高有線性相關(guān)性。
　　4.p65mRNA、I-κBmRNA在肺組織中的表達水平呈現(xiàn)負相關(guān)。
　　5.氯喹與PDTC濃度越高,炎癥因子表達水平越