注射用維通的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與藥效學(xué)研究.pdf

1、盆腹腔術(shù)后粘連主要指因外科手術(shù)或炎癥所導(dǎo)致的原本分離的臟器之間或臟器與壁膜層出現(xiàn)范圍不定的粘連或形成纖維索帶。研究表明：有高達(dá)93%～100%經(jīng)歷過外科手術(shù)的病人發(fā)生術(shù)后粘連。西醫(yī)西藥治療術(shù)后粘連主要有手術(shù)途徑和使用抗炎類藥物，但手術(shù)途徑增加了病患的痛苦，而抗炎類藥物多為單一藥效，其療效也有待進(jìn)一步評(píng)價(jià)。近年，隨著中醫(yī)藥研究的飛速發(fā)展，很多中藥經(jīng)方和驗(yàn)方被應(yīng)用到臨床治療中。中藥以其多靶點(diǎn)發(fā)揮療效、毒副作用小、易被患者接受等優(yōu)勢，成為防治

2、術(shù)后粘連又一重要途徑，具有較好的發(fā)展前景與開發(fā)價(jià)值。 注射用維通（Weitong Injection，WTI）是南方醫(yī)院藥學(xué)部在常通口服液（Changtong Oral Liquid，CTOL）研究基礎(chǔ)上，研制開發(fā)的純中藥粉針劑型。含有改善微循環(huán)、抑制炎癥反應(yīng)、抗?jié)B出的活性成分和藥理功效，臨床主要用于防治術(shù)后粘連。盡管中藥注射劑在臨床應(yīng)用存在許多問題，但是無可否認(rèn)的是在某些急性疾?。ɡ缧g(shù)后粘連）的治療過程中，中藥注射劑具有起效

3、快、毒副作用小和不受術(shù)后禁食期限制等優(yōu)點(diǎn)，與常通口服液配套使用，腹部手術(shù)后早期使用靜脈滴注制劑（WTI），恢復(fù)飲食以及出院后使用口服制劑（CTOL），是術(shù)后粘連防治體系中的理想和期待的臨床用藥方式。 目的： 1.WTI中主要成分D和Q的含量測定。2.觀察小鼠對注射用維通的急性毒性反應(yīng)。3.研究注射用維通對實(shí)驗(yàn)性腸粘連大鼠和兔的防治效果。 方法： 1.WTI主要成分的分析研究 1.1WTI中D含量測

4、定 色譜條件為：流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液（0.5%NaH2PO4-0.03%H3PO4）：甲醇=95：5；檢測波長220nm；流速：1mL·min-1；色譜柱：Luna（）5uC18（2）100A色譜柱（150×4.60mm，5μm）；柱溫：室溫。在此條件下進(jìn)行線性范圍考察、陰性對照試驗(yàn)、精密度實(shí)試驗(yàn)、回收率試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)與WTI樣品測定。 1.2WTI中Q含量測定 流動(dòng)相：乙腈：1%磷酸溶液=40：60；檢測波長

5、220nm；流速：1mL·min-1；色譜柱：Luna（）5uC18（2）100A色譜柱（150×4.60mm，5μm，美國Phenomenex公司）；柱溫：室溫。在此條件下進(jìn)行線性范圍考察、陰性對照試驗(yàn)、精密度實(shí)試驗(yàn)、回收率試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)與WTI樣品測定。 1.3WTI中總皂苷含量測定 用氫氧化鈉水解皂苷上的2個(gè)酯基，然后將過剩氫氧化鈉用鹽酸回滴定。 2.WTI的急性毒性實(shí)驗(yàn)研究 50只小鼠隨機(jī)分為5

6、組，各組尾靜脈注射不同濃度WTI，觀察小鼠的活動(dòng)與毒性反應(yīng)，根據(jù)小鼠死亡情況計(jì)算出WTI的LD50。 3.WTI對術(shù)后粘連模型的藥效研究 動(dòng)物（大鼠和兔子）均采用多因素法制備成術(shù)后粘連模型后，隨機(jī)分為模型對照組、地塞米松組、WTI高、中、低劑量組，另取8只動(dòng)物作為正常對照組，其中WTI高、中、低劑量組從手術(shù)當(dāng)日起，每日注射WTI，連續(xù)7d。各組于術(shù)后7d給藥1h后麻醉開腹，評(píng)價(jià)腹腔組織粘連程度，采血檢查血常規(guī)，取正常與粘

7、連的盲腸壁組織作病理切片檢查，并檢測羥脯氨酸（Hydroxyproline，HyP）含量。 結(jié)果： 1.WTI主要成分的分析研究 測得WTI中D含量為4.99%，Q-A含量為14.98%，Q-B含量為11.42%，采用的色譜方法不受其它組分的干擾，精密度、回收率、穩(wěn)定性良好，線性范圍可滿足測定的需要。WTI總皂苷含量為51.20%。 2.WTI的LD50為8.4mg/Kg。 3.WTI的藥效學(xué)研究

8、 3.1WTI對大鼠術(shù)后粘連模型的藥效研究 3.1.1WTI對大鼠粘連程度的影響 大鼠各實(shí)驗(yàn)組粘連程度均存在顯著性差異（P<0.05）。其粘連程度由輕到重的順序是：正常對照組

9、0.05）；WTI高、中劑量組WBC與正常對照組無顯著性差異；WTI低劑量組WBC與正常對照組有顯著性差異（P<0.05）。②WTI低劑量組和正常對照組紅細(xì)胞（RedBloodCell，RBC）與地塞米松組有顯著性差異（P<0.05）；與模型組相比，正常對照組和WTI低劑量組RBC存在顯著性差異（P<0.05）；正常對照組RBC與WTI中劑量組見存在顯著性差異（P<0.05）。③模型對照組血小板（BloodPlatelet，PLT）與W

10、TI低劑量組無顯著差異（P>0.05），但與其余各組有顯著性差異（P<0.05）；地塞米松組PLT與其余各組均有顯著差異（P<0.05）；正常對照組LYM與WTI高、中劑量組均有顯著性差異（P<0.05）。④與模型組對比，除了WTI低劑量組淋巴細(xì)胞（Lymphocyte，LYM）無顯著性差異外，其他各組均有顯著性差異（P<0.05）；WTI高、中劑量組LYM均與正常對照組存在顯著性差異（P<0.05）；地塞米松組LYM與其余各組存在顯著

11、性差異（P<0.05）。 3.1.3WTI對大鼠盲腸壁組織羥脯氨酸（Hyroxyproline，HyP）含量的影響 與模型對照組相比，WTI能顯著性減低大鼠盲腸壁組織中Hyp含量。 3.1.4大鼠病理切片觀察 WTI具有減少炎性細(xì)胞和纖維組織增生的作用。 3.2WTI對兔術(shù)后粘連模型的作用研究 3.2.1WTI對兔粘連程度的影響 兔各實(shí)驗(yàn)組粘連程度均存在顯著性差異（P<0.05）。

12、其粘連程度從輕到重的順序是：正常對照組

13、TI對兔血液中細(xì)胞因子的影響 與模型對照組相比，WTI能顯著性降低兔子血漿中的組織纖溶酶原活化劑（TissuePlasminogenActivator，t-PA）和升高纖溶酶原活化物抑制因子（PlasminogenActivatorInhibitor，PAI-1）；與模型對照組相比，WTI能顯著性降低兔子血清中白介素-1β（Interleukin-1Beta，IL-1β）和生長轉(zhuǎn)化因子β（TransformingGrowthFa