康復訓練對腦梗死大鼠患側海馬CA1區(qū)Bcl-2和Bax的影響及其與學習記憶的關系.pdf

1、目的：腦梗死是危害人類健康的常見病、多發(fā)病，患者常有相應的運動、感知覺及學習記憶功能障礙，其中學習記憶障礙最為常見、持久。康復訓練能明顯改善大腦神經(jīng)功能和學習記憶能力，對大腦的功能重組和代償起著重要作用。但其機制目前為止尚不十分明確，本課題通過觀察康復訓練對腦梗死大鼠患側海馬CA1區(qū)Bcl-2和Bax的影響及其與學習記憶的關系，從細胞凋亡角度探討康復訓練對腦梗死大鼠學習記憶能力、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的可塑性影響及其可能機制。 方法：(1

2、)研究對象和干預措施：選用雄性Wister大鼠，參照小泉線栓法制成大鼠右側大腦中動脈(middlecerebral artery occlusion，MCAO)腦梗死模型，術后2小時進行模型成功評價。54只腦梗死造模成功的大鼠隨機選取8只作為24小時組，觀察腦梗死后24小時后的基礎Bcl-2和Bax值，其余48只隨機分為腦梗死自由活動組(對照組)和腦梗死康復訓練組(康復組)，每組各24只?？祻徒M于術后24小時開始進行滾筒式網(wǎng)狀訓練、轉棒

3、行走訓練、平衡棒行走訓練及網(wǎng)屏訓練。對照組置于普通籠中正常喂養(yǎng)，不給予任何訓練。(2)觀察指標：①神經(jīng)和運動功能：對照組和康復組在術后各時點(手術后1周、2周、3周)分別進行神經(jīng)功能(采用Bederson法)及運動功能評分(包括轉棒實驗、平衡木實驗、網(wǎng)屏實驗)；②學習記憶能力，對照組和康復組大鼠在術后1周、2周、3周采用Y-型迷宮進行學習記憶能力測評；③免疫組化定位、定性、定量分析：用Bcl-2和Bax試劑盒SABC顯色法檢測患側海馬C

4、A1區(qū)Bcl-2和Bax蛋白的表達情況，用原位末端標記技術(terminaldeoxynucleotidyl transferse mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)原位末端標記法染色該區(qū)檢測凋亡情況，術后24小時組于術后24小時取材，康復組和對照組于術后1周、2周、3周神經(jīng)及運動功能測評完畢后取材。(3)統(tǒng)計學處理：用SPSS10.0 for WINDOWS進行統(tǒng)計學分析。所有數(shù)值結果均用x±

5、s表示，P<0.05為差異有顯著性。對大鼠神經(jīng)功能、運動能力、學習記憶能力測評結果采用t檢驗進行兩兩比較。對免疫組化統(tǒng)計結果的統(tǒng)計學分析采用單因素方差分析和t檢驗，并用SNK-q檢驗進行組間差異比較。 結果：(1)神經(jīng)功能評分：在手術后1周，對照與康復組比較差異無顯著性(P>0.05)，在手術后2周和3周兩組比較差異有顯著性(P<0.05)。運動功能評分：轉棒行走訓練：手術后1周、2周和3周組對照組與康復組比較差異均有顯著性(P

6、<0.05)；平衡木步行訓練：手術后1周對照組與康復組比較差異無顯著性(P>0.05)，在手術后2周和3周比較差異有顯著性(P<0.05)；網(wǎng)屏實驗：對照組在手術后1周與康復組比較差異無顯著性(P>0.05)，在手術后2周和3周比較差異有顯著性(P<0.05)。(2)學習記憶能力測評：康復組和對照組大鼠在各時間點處死前進行學習記憶能力測評，康復組大鼠Y-迷宮分辨學習能力康復各組均明顯優(yōu)于對照組(P<0.05)。(3)Bcl-2免疫組化染

7、色結果及陽性產(chǎn)物圖像分析儀統(tǒng)計分析結果：海馬CAl區(qū)Bcl-2蛋白表達陽性神經(jīng)元在對照組呈現(xiàn)出隨著時間的推移而逐漸下降的趨勢，而在康復組則呈現(xiàn)為先上升再下降的趨勢，在每個時間段上，康復組Bcl-2蛋白表達陽性神經(jīng)元數(shù)均比對照組多，該差異具有顯著性(P<0.05)。Bax免疫組化染色結果及陽性產(chǎn)物圖像分析儀統(tǒng)計分析結果：康復組及對照組均隨著時間的推移呈現(xiàn)下降的趨勢，但兩組在各個時間點均表現(xiàn)為：康復組的Bax蛋白表達陽性神經(jīng)元數(shù)比對照組少，

8、該差異具有顯著性(P<0.05)。TUNEL染色結果：各組大鼠海馬CAl區(qū)均可見TUNEL陽性神經(jīng)元細胞，主要分布于錐體細胞和顆粒細胞層。從凋亡指數(shù)(apoptosis index，AI，AI=視野內(nèi)凋亡細胞個數(shù)/視野內(nèi)所有神經(jīng)細胞個數(shù)x100％)分析：對照組凋亡指數(shù)先上升，隨后緩慢下降，而康復組的凋亡指數(shù)則一直處于下降的狀態(tài)，而且，在各個時間點上，對照組的凋亡指數(shù)高于康復組(P<0.05)。 結論：①康復訓練增加海馬CA1區(qū)B