自制PV液對大鼠肝臟低溫保存的實驗研究.pdf

1、目的:探討自制PV液對大鼠肝臟低溫保存的效果及機理,為PV液在供肝保存中的應(yīng)用提供一定的理論和實驗依據(jù)。
　　 材料與方法:1.采用規(guī)范的制劑標(biāo)準(zhǔn),按照配方配制肝臟保存液PV液,采用無菌濾過法消毒,PH值調(diào)定為8.0±0.5,滲透壓為(320±10)mOsm/L。
　　 2.實驗分組:采用成年、健康、清潔級、雄性Wistar大鼠90只,體重200～250g。根據(jù)使用灌洗保存液的種類將大鼠隨機的分為UW液組、PV液組、NS

2、組,每組30只大鼠,再根據(jù)不同的保存時間將3組隨機分為保存0h、6h、12h、18h、24h5個亞組,每個亞組6只大鼠。
　　 3.動物模型:戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后采用大鼠離體肝臟再灌注模型(IPRL)為實驗?zāi)Ｐ?對大鼠肝臟進行灌注后低溫保存。
　　 4.檢測內(nèi)容:分別在保存0h、6h、12h、18h、24h后收集灌注流出液,測定保存不同時段后肝臟酶學(xué)變化(ALT、AST、LDH)、灌注流出液中氧自由基代謝產(chǎn)物丙二醛(

3、MDA)與超氧化物歧化酶(SOD)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的含量,記錄離體灌注時膽汁分泌量,光鏡、電鏡下觀察肝臟組織學(xué)變化。
　　 結(jié)果:1.酶學(xué)指標(biāo):三組灌注流出液中酶含量均隨著保存時間的延長而增高,相同時相灌注流出液中ALT、AST、LDH含量均比NS組顯著降低(P<0.05),UW液組與PV液組之間無顯著差異(P>0.05),但PV液組有低于UW液組的趨勢。
　　 2.丙二醛與超氧化物歧化酶含量:每組的MD

4、A含量均隨著保存時間的延長而增高,而SOD則相反,隨著保存時間延長而減少。PV液組與UW液組各時相MDA含量明顯低NS組(P<0.01),SOD高于NS組,保存12h后PV液組的MDA含量低于UW液組(P<0.01),PV液組與UW液組的SOD含量無顯著差異(P>0.05)。
　　 3.腫瘤壞死因子-α含量:PV液組與UW液組各時相TNF-α值與NS組相比有顯著減少(P<0.01),保存6h后PV液組與UW液組有統(tǒng)計學(xué)差異(P<

5、0.05),PV液組TNF-α值高于UW液組。
　　 4膽汁分泌量:肝臟開始灌注后,即有金黃色的膽汁分泌出,隨著保存時間的延長,膽汁分泌量逐漸減少。各時相相比,PV液組與UW液組膽汁分泌量顯著高于NS組(P<0.05),保存18h后,PV液組明顯低于UW液組(P<0.05)。
　　 5.光鏡觀察:隨著保存時間的延長,肝臟損傷逐漸加重,肝細胞逐漸出現(xiàn)胞漿疏松、水腫甚至壞死,肝竇內(nèi)皮細胞腫脹,逐漸脫落至肝竇隙。各組之間相比,

6、UW液組損傷最輕,NS組損傷最重,主要體現(xiàn)在細胞水腫方面,肝小葉及肝竇結(jié)構(gòu)尚清晰、規(guī)則。
　　 6.電鏡觀察:隨著保存時間的延長,細胞腫脹加重,細胞質(zhì)溶解,肝細胞空泡變性,而線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)無明顯結(jié)構(gòu)變化。各組之間相比較,NS組肝細胞水腫明顯,部分出現(xiàn)溶質(zhì)溶解、核固縮,UW液組與PV液組輕度水腫,未見明顯的細胞結(jié)構(gòu)及組成異常。
　　 結(jié)論:PV液與UW液對Wistar大鼠肝臟功能具有保護作用,減輕肝臟的缺血-再灌注損傷;兩