環(huán)孢霉素A預(yù)處理對(duì)保存大鼠肝臟的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討環(huán)孢霉素A預(yù)處理對(duì)HTK液冷灌注保存12小時(shí)供肝的可能保護(hù)作用及移植后對(duì)肝臟的影響，為實(shí)驗(yàn)及臨床肝臟移植提供參考依據(jù)。 方法：選用雄性成年SD大鼠共130只，體重約210±20克，采用Kamada雙袖套法并加以改進(jìn)，建立冷保存時(shí)間12小時(shí)的SD大鼠原位肝移植模型，大鼠隨機(jī)分為兩組：A組即對(duì)照組，供肝獲取后HTK液4℃保存12小時(shí)，行原位肝移植；B組即實(shí)驗(yàn)組，用含1μM的環(huán)孢霉素A預(yù)處理的HTK液4℃灌注保存12小時(shí)，行

2、原位肝移植。各組大鼠肝臟保存期0h、3h、6h、12h分別留取灌洗液及移植后12h、24h、48h、72h、術(shù)后7天分別留取血清和肝臟組織標(biāo)本，每一時(shí)相點(diǎn)取5-8只大鼠測(cè)定血清ALT、AST、LDH水平評(píng)估肝細(xì)胞的功能，測(cè)定肝組織線粒體功能指標(biāo)RCR、P/0值及ATP含量評(píng)估線粒體功能，光鏡及透射電鏡觀察組織結(jié)構(gòu)改變，TUNEL法檢測(cè)肝組織細(xì)胞調(diào)亡，免疫組化法檢測(cè)Bcl-2的表達(dá)。計(jì)量資料均用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差(X±標(biāo)準(zhǔn)差)表示，所有數(shù)據(jù)應(yīng)

3、用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，統(tǒng)計(jì)方法采用方差分析或t檢驗(yàn)，P＜0.05判定為差異具有顯著性意義。 結(jié)果： ①兩組不同時(shí)間段肝臟ALT、AST、LDH含量：B組供肝保存12小時(shí)的ALT、AST、LDH水平分別為65.57±7.89、34.71±6.26、473.85±285.66與A組供肝保存12小時(shí)的ALT、AST、LDH水平分別為94.86±27.19、58.29±22.27、681.38±160.32比較，差異具

4、有顯著性意義p＜0.05。在保存期卟、3h、6h、兩組3種指標(biāo)均無(wú)顯著意義p＞0.05。B組在移植后12h血清中ALT、AST、LDH水平分別為788±94.43、568.2±55.62、916.6±53.26；24h血清中ALT、AST、LDH水平分別為498.8±77.83、259±71.16、687.8±43.52；48h血清中ALT、LDH水平分別為398.4±35.22、439.5±28.02；72h血清中ALT、LDH水平分

5、別為268.2±50.97、316.2±97.52，與A組血清中同一時(shí)間段ALT、AST、LDH水平比較均較A組低，p＜0.05具有顯著意義，術(shù)后168小時(shí)即術(shù)后7天血清中ALT、AST水平兩組兩種指標(biāo)比較無(wú)差異p＞0.05。術(shù)后7天血清中LDH兩組比較有差異，p＜0.05。 ②不同時(shí)間段肝細(xì)胞呼吸功能指標(biāo)RCR及P/O比較：B組移植肝臟在保存12小時(shí)RCR值為3.20±0.24，A組為3.05±0.24，B組與A組比較具有顯著

6、意義，p＜0.05。移植后12小時(shí)、24小時(shí)、術(shù)后7天A組RCR分別為2.37±0.13、1.86±0.44、3.47±0.25，B組分別為2.61±0.11、2.40±0.24、3.61±0.12兩組同一時(shí)間段比較有顯著意義，P/O比值A(chǔ)組保存12小時(shí)為1.33±0.05，移植后12小時(shí)為1.29±0.04，移植后24小時(shí)為1.38±0.02，移植后7天為1.50±0.06；B組分別為1.47±0.07、1.38±0.04、1.43±

7、0.35、1.56±0.04，兩組同一時(shí)間段比較有顯著意義，p＜0.05。 ③不同時(shí)間段肝臟ATP含量比較：保存后12小時(shí)及移植后12h、24h、48h、72h、168hATP含量B組分別為1.19±0.04、0.85±0.10、1.20±0.08、1.22±0.08、1.25±0.05、1.43±0.04與A組1.05±0.10、0.56±0.17、1.05±0.03、1.09±0.06、1.16±0.04、1.29±0.09

8、比較均有顯著意義，p＜0.05。 ④肝臟組織形態(tài)學(xué)及透射電鏡觀察：HE染色A組病理學(xué)改變較B組重，于保存12小時(shí)出現(xiàn)較明顯變化，炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肝臟空泡樣變性明現(xiàn)，移植術(shù)后12小時(shí)出現(xiàn)肝細(xì)胞點(diǎn)片狀及橋狀灶性壞死持續(xù)至術(shù)后48小時(shí)，A組透射電鏡觀察，術(shù)后24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)線粒體腫脹，嵴斷裂明顯，細(xì)胞核染色質(zhì)邊集。B組透射電鏡觀察線粒體腫脹輕，核分裂現(xiàn)象明顯。 ⑤TUNEL檢測(cè)結(jié)果：兩組均于保存12小時(shí)出現(xiàn)肝組織細(xì)胞的

9、調(diào)亡數(shù)增多，A組與B組各同時(shí)間段保存12小時(shí)組、移植術(shù)后1/2小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)組兩兩比較，B組較A組調(diào)亡指數(shù)小，均有顯著性意義，P＜0.05。 ⑥兩組肝臟不同時(shí)間段Bcl-2表達(dá)：發(fā)現(xiàn)在同一時(shí)間段B組的表達(dá)比A組表達(dá)明顯，尤其以肝臟灌注冷保存12小時(shí)及復(fù)流后1/2小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)明顯。與凋亡指數(shù)呈反比表現(xiàn)，說(shuō)明Bcl-2蛋白具有一定的抗凋亡的作用。 ⑦A組7天大鼠的