乳腺癌患者外周血CK-7、CK-20、hMAM、C-erbB-2、VEGFR-1、VLA-4的表達(dá)研究.pdf

1、目的:應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)乳腺癌患者外周血中的細(xì)胞角蛋白7(Cytokeratin-7，CK-7)、細(xì)胞角蛋白20(Cytokeratin-20，CK-20)、人乳腺珠蛋白(humanmammaglobin，hMAM)、C-erbB-2、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1(vascularendothelial growth factor acceptor 1，VEGFR-1)、黏附分子非常延遲抗原4(adhesion molecules of

2、 very late antigen 4，VLA-4，又名integrina<,4>β<,1>，即整合素a<,4>β<,1>)，評(píng)價(jià)這些標(biāo)志物與臨床的關(guān)系，探索它們?cè)谖⑥D(zhuǎn)移中的意義。 方法:本研究共收集標(biāo)本202例，取自2004年12月至2006年12月我院附屬醫(yī)院所收治韻40例乳腺癌患者，44例肺癌、21例鼻咽癌、17例消化道腫瘤、13例生殖道腫瘤、11例惡性淋巴瘤、9例泌尿道腫瘤、6例頭頸部其他腫瘤、5例肝膽腫瘤、5例其他腫

3、瘤、10例乳腺增生、纖維腺瘤等良性乳腺疾病患者，并以21例健康志愿者作對(duì)照，MCF-7乳腺癌細(xì)胞系作實(shí)驗(yàn)敏感性指標(biāo)。取外周血分離收集淋巴細(xì)胞，提取RNA，以GAPDH為內(nèi)參照，RT-PCR技術(shù)檢測(cè)CK-20、hMAM、C-erbB-2、VEGFR-1、VLA-4；同時(shí)，在檢測(cè)目的基因引物特異性基礎(chǔ)上，通過SYBR Green熒光定量技術(shù)對(duì)CK-7的相對(duì)表達(dá)水平進(jìn)行分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：以卡方檢驗(yàn)和四格表確切概率法分析。 結(jié)果:

4、 (1)敏感性測(cè)定：內(nèi)參GAPDH和目的基因CK-7、CK-20、C-erbB-2的敏感性為10<'7>，VEGFR-1為10<'-6>，hMAM為10<'-5>， MCF-7細(xì)胞不表達(dá)VLA-4。 (2)定性分析：①正常健康對(duì)照、乳腺良性疾病、惡性淋巴瘤均不表達(dá)VEGFR-1。正常健康對(duì)照CK-7、CK-20、C-erbB-2、VLA-4的相對(duì)表達(dá)水平分別為28.57％(6/21)、4.76％(1/21)、19.05％(4/

5、21)、9.52％(2/21)；乳腺良性疾病病人CK-7、CK-20、C-erbB-2、hMAM、VLA-4的相對(duì)表達(dá)水平分別為20.0％(2/10)、10.0％(1/10)、40.0％(4/10)、10.0％(1/10)、10.0％(1/10)。②乳腺癌CK-7的相對(duì)表達(dá)水平為90.0％(36/40)、CK-20為77.5％(31/40)、C-erbB-2為82.5％(33/43)、VLA-4為57.5％(23/43)，高于鼻咽癌、消

6、化道腫瘤、惡性淋巴瘤、乳腺良性疾病和正常對(duì)照的表達(dá)(P<0.05)；乳腺癌CK-7、CK-20、C-erbB-2的表達(dá)也高于生殖道腫瘤、其他腫瘤(P<0.05)；乳腺癌CK-7、C-erbB-2、VLA-4的表達(dá)高于肺癌(P<0.05)：乳腺癌CK-7、CK-20、VLA-4的表達(dá)高于頭頸部其他腫瘤(P<0.05)：乳腺癌CK-20、C-erbB-2、VLA-4的表達(dá)高于泌尿道腫瘤(P<0.05)：乳腺癌hMAM的表達(dá)在各腫瘤和乳腺良性

7、疾病、正常健康對(duì)照間無顯著差異，僅泌尿道腫瘤hMAM的表達(dá)明顯高于乳腺癌(P<0.001)；2.5％的乳腺癌(1/40)和29.55％的肺癌(13/44)可表達(dá)VEGFR.1，肺癌顯著高于乳腺癌(P<0.001)。③各標(biāo)志物在乳腺癌、肺癌、鼻咽癌各期中的表達(dá)無顯著差異。 (3)CK-7相對(duì)定量分析結(jié)果表明，①Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期的乳腺癌、肺癌、鼻咽癌的CK-7相對(duì)表達(dá)量逐漸升高，乳腺癌Ⅳ期CK-7的相對(duì)表達(dá)量最高。②對(duì)同一病人

8、進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)a.術(shù)前表達(dá)高于術(shù)后。b.出現(xiàn)轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)時(shí)相對(duì)表達(dá)量增加。c.腫塊縮小或病情穩(wěn)定時(shí)相對(duì)表達(dá)量減少。 結(jié)論:(1)用RT-PCR方法檢測(cè)乳腺癌患者外周血中的腫瘤標(biāo)志物，在乳腺癌微轉(zhuǎn)移診斷及預(yù)后判斷中具有重要意義。(2)CK-7、CK-20、C-erbB-2、VLA-4、VEGFR-1可以作為外周血檢測(cè)乳腺癌微轉(zhuǎn)移的敏感標(biāo)志物。(3)CK-7可以作為上皮性腫瘤治療效果的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)指標(biāo)。(4)hMAM不能作為乳腺癌微轉(zhuǎn)移