水通道蛋白4 siRNA聯(lián)合亞低溫治療創(chuàng)傷后腦水腫的研究.pdf

1、腦水腫是顱腦創(chuàng)傷(Traumatic Brain Injury,TBI)后病情惡化和導(dǎo)致死亡的重要因為之一,有效控制和減輕TBI后腦水腫的發(fā)展對于提高TBI的救治水平有著舉足輕重的意義。
　　 近年大量研究證實,亞低溫在減輕TBI后腦水腫程度、降低顱內(nèi)壓方面具有肯定的治療效果,與亞低溫環(huán)境降低大量參與蛋白的反應(yīng)活性密切相關(guān),但其具體機制尚未完全明了。亞低溫臨床應(yīng)用上由于其并發(fā)癥的存在,對于腦水腫的控制在一定程度上受到限制。

2、>　　 實驗證明,水通道蛋白4(Aquaporin4,AQP4)在TBI后腦水腫的發(fā)生發(fā)展過程中起到重要的調(diào)節(jié)作用,通過AQP4基因沉默的方法可在一定程度上減輕TBI后的腦水腫程度。目前,這種基因治療方法在動物實驗上已經(jīng)取得一定進展,其特異的緩解腦水腫作用令人振奮,是基因治療研究中的熱點。小干擾RNA(siRNA)技術(shù)可以在信使RNA(mRNA)水平上抑制靶基因表達,還可以在染色質(zhì)水平上沉默基因的基因治療方法。
　　 本研究擬

3、結(jié)合亞低溫在降低顱內(nèi)壓方面的廣譜干預(yù)機制和AQP4siRNA技術(shù)在降低腦水腫方面的專一性,將二者聯(lián)合應(yīng)用,觀察其在減輕腦水腫,改善神經(jīng)功能方面的作用效果,為今后該領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用提供數(shù)據(jù)資料和參考意見。
　　 目的:應(yīng)用針對靶向水通道蛋白4(Aquaporin4,AQP4)的siRNA技術(shù)優(yōu)化亞低溫減輕顱腦創(chuàng)傷(Traumatic BrainInjury,TBI)后腦水腫程度的治療效果。
　　 方法：構(gòu)建沉默AQ

4、P4mRNA表達的siRNA質(zhì)粒；液壓打擊法建立大鼠TBI模型,共分4組:TBI組(對照組)、AQP4siRNA治療組、亞低溫治療組、AQP4siRNA及亞低溫聯(lián)合治療組；干/濕比重法和Evans藍測定法觀察大鼠TBI后不同時相腦組織含水量和血腦屏障通透性改變；分別提取第1、3、5、7天大鼠腦組織總RNA和總蛋白,RT-PCR和WesternBlot方法檢測AQP4的mRNA和蛋白表達水平；實驗動物予以神經(jīng)功能缺陷綜合評分。
　　

5、 結(jié)果：
　　 (1)同對照組比較,3個治療組實驗大鼠在TBI后第7天的平均神經(jīng)功能缺陷綜合得分均低于對照組(P<0.05),其中,AQP4siRNA聯(lián)合亞低溫治療組治療效果優(yōu)于單純AQP4siRNA治療組和單純亞低溫治療組(P<0.05)。
　　 (2)RT-PCR結(jié)果顯示AQP4siRNA治療組降低AQP4mRNA效果優(yōu)于亞低溫治療組(P<0.05),但劣于AQP4siRNA與亞低溫聯(lián)合治療組(P<0.05)；We

6、sternBlot方法檢測AQP4siRNA治療組降低AOP-4蛋白表達效果優(yōu)于亞低溫治療組(P<0.05),但劣于AQP4siRNA與亞低溫聯(lián)合治療組(P<0.05)。
　　 (3)干/濕比重法檢測顯示亞低溫治療組降低腦水腫程度優(yōu)于AQP4siRNA治療組(P<0.05),但劣于AQP4siRNA與亞低溫聯(lián)合治療組(P<0.05)。
　　 (4)Evans藍測定法顯示造模大鼠于創(chuàng)傷后早期血腦屏障通透性即開始增加,于創(chuàng)傷

7、后第3天達到最大值,此后逐漸減輕,該變化過程與腦組織水含量改變趨勢相平行。與對照組比較,3個治療組均顯示出一定的治療效果。亞低溫治療組在降低血腦屏障通透性方面優(yōu)于AQP4siRNA治療組(P<0.05),但劣于AQP4siRNA與亞低溫聯(lián)合治療組(P<0.05)。
　　 結(jié)論：亞低溫在減輕TBI后腦水腫程度方面優(yōu)于AQP4siRNA,但siRNA技術(shù)在沉默AQP4表達方面強于亞低溫,聯(lián)合應(yīng)用AQP4siRNA和亞低溫在TBI后降