BDNF在抑郁癥病程中的變化及其對(duì)神經(jīng)發(fā)生影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 1、建立和優(yōu)化BDNF的檢測(cè)手段并觀察其在正常人群和抑郁癥患者體液中的濃度,并探討B(tài)DNF的變化與抑郁癥發(fā)生、嚴(yán)重程度以及臨床治療反應(yīng)的關(guān)系。
　　 2、觀察BDNF在抑郁癥實(shí)驗(yàn)大鼠模型腦內(nèi)海馬等結(jié)構(gòu)的改變及腦內(nèi)注射BDNF后海馬區(qū)神經(jīng)前體細(xì)胞的變化,并觀察體外BDNF對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞定向單胺類神經(jīng)元分化的影響。
　　 方法和結(jié)果
　　 1、抑郁癥患者血清及腦脊液中BDNF的檢測(cè):收集正常健康人

2、88例和抑郁癥患者42例的血液及腦脊液樣本,離心后取上清測(cè)定血清及腦脊液中BDNF的濃度。BDNF檢測(cè)采用改良ELISA法,將BDNF單克隆抗體進(jìn)行固化處理。結(jié)果顯示:不同程度抑郁癥患者體液中BDNF的水平均明顯低于正常人群,相差非常顯著,且病情越嚴(yán)重下降越明顯,有效的抗抑郁治療伴隨有BDNF的明顯升高。
　　 2、抑郁動(dòng)物模型的建立及BDNF對(duì)海馬區(qū)微管相關(guān)蛋白Doublecortin表達(dá)的影響:采用大鼠強(qiáng)迫性游泳(行為絕望)

3、和慢性溫和的不可預(yù)知性應(yīng)激進(jìn)行造模。將24只大鼠按隨機(jī)分為3組(正常對(duì)照組、應(yīng)激組和應(yīng)激+給藥組);應(yīng)激組和給藥組分別進(jìn)行慢性應(yīng)激,神經(jīng)行為學(xué)觀察顯示其產(chǎn)生明顯抑郁行為;在第28天時(shí),給藥組給予側(cè)腦室注射BDNF(0.5μg),一周后處死大鼠。檢測(cè)腦組織中BDNF的表達(dá)特別是海馬區(qū)Doublecortin陽(yáng)性細(xì)胞改變。結(jié)果顯示:應(yīng)激組海馬區(qū)和皮質(zhì)BDNF表達(dá)均低于空白對(duì)照組,在給予BDNF腦內(nèi)注射后有所增加。應(yīng)激組海馬區(qū)域DCX陽(yáng)性細(xì)胞

4、數(shù)明顯低于正常對(duì)照,BDNF能促進(jìn)大鼠海馬區(qū)域DCX陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增多,與未注射組存在明顯差異(P＜0.05)。
　　 3、神經(jīng)干細(xì)胞分離培養(yǎng)與BDNF對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞分化的影響
　　 取胎鼠大腦皮層組織,以無(wú)血清培養(yǎng)技術(shù)分離培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞,并獲得免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定。在血清誘導(dǎo)分化過程中,BDNF處理組細(xì)胞生長(zhǎng)分化更為旺盛迅速,死亡細(xì)胞較少,突起更為致密。BDNF處理能明顯增加分化后Tuj-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量,誘導(dǎo)分化5天后Tuj

5、-1陽(yáng)性細(xì)胞百分率在對(duì)照組為7.8％±1.65％,BDNF處理組為20.1±6.4％,tuj-1陽(yáng)性細(xì)胞的突起數(shù)在BDNF處理組也明顯高于對(duì)照組。
　　 同時(shí)BDNF處理能顯著增加分化細(xì)胞群體中酪氨酸羥化酶(TH)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量,分化第5天TH陽(yáng)性細(xì)胞率在對(duì)照組為1.4±0.3％,BDNF處理組為3.7±0.6％,提示BDNF能促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞定向多巴胺能神經(jīng)元的分化。分化第7日也呈現(xiàn)相似趨勢(shì)。
　　 結(jié)論
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6、.抑郁癥患者血清和腦脊液中BDNF水平顯著降低,并且和疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)。抑郁的有效治療伴有BDNF水平的回升恢復(fù)。
　　 2.通過強(qiáng)迫性游泳和慢性應(yīng)激的方法建立抑郁癥動(dòng)物模型是穩(wěn)定的,體液中和腦組織中BDNF在應(yīng)激組均較對(duì)照組明顯降低,在經(jīng)BDNF治療后,腦組織特別是海馬區(qū)Doublecortin陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯增加。提示神經(jīng)發(fā)生特別是前體細(xì)胞遷移增加。
　　 3、在體外培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞體系,BDNF可顯著促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞