頭孢地嗪免疫調(diào)節(jié)作用LPS-TLR-,4--NF-kappaB途徑的研究.pdf

1、背景： 自抗菌藥物應用以來，人們普遍認為感染性疾病的預后主要取決于抗菌藥物與病原菌的相互作用，忽視了人體免疫機制在殺滅細菌過程中的重要作用。然而實踐證明，有效的抗菌藥物治療，必須有完整的機體防御機制參與。機體的防御功能在感染性疾病的預后上起著重要的作用?？咕幬锏淖饔貌皇撬幬飳毦膯我蛔饔茫强咕幬?，機體和病原菌之間相互作用的一個復雜過程。 抗菌藥物的免疫調(diào)節(jié)作用已積累了一定的資料，研究最多的是頭孢地嗪(Cefod

2、izime，CDZM)和頭孢咪唑(Cefpimizole)，其中又以頭孢地嗪最為豐富。有研究表明，頭孢地嗪有明顯的免疫調(diào)節(jié)作用，但目前的研究大多數(shù)是對臨床效應的觀察，．對其機制的較深入的探索還處于起始階段。 CDZM與其他頭孢菌素一樣具有較廣的抗菌譜。動物實驗和臨床觀察發(fā)現(xiàn)，CDZM在體內(nèi)的抗菌活性比較顯著，特別是對免疫缺陷動物的實驗感染模型的治療中取得了明確效果，提示其在抗菌的同時對宿主的防御功能起協(xié)同作用，研究表明它的增強機

3、體防御功能性質(zhì)與其結(jié)構有密切關系． 近年來，隨著分子生物學的飛速發(fā)展，人們對免疫應答及免疫調(diào)節(jié)機制的研究逐步上升到分子水平，抗原受體及其他細胞膜分子介導的信號傳遞過程的研究已成當代免疫學研究的主要前沿領域。因此，對疾病發(fā)生與發(fā)展過程中信號轉(zhuǎn)導初制的研究已成為現(xiàn)代危重病醫(yī)學領域的前沿課題。通過對頭孢地嗪信號轉(zhuǎn)導機的分析探討，明確其合適的劑量與療程，闡明免疫調(diào)節(jié)基團的作用機制，改建與構建合理的化學基團，做到抗病毒、抗菌和免疫調(diào)節(jié)的合

4、理統(tǒng)一。 革蘭氏陰性桿菌引起機體損傷主要由LPS介導，人體集聚革蘭氏陰性桿菌最豐富的場所是腸道，所產(chǎn)生的LPS首先到達肝臟。于是肝臟成了LPS第一個攻擊的靶器官。在慢性肝病殘存肝細胞很少的基礎上再次經(jīng)受LPS的損傷，就可能導致肝衰竭的發(fā)生。一般認為，LPS入侵機體，首先借助LBP(脂多糖結(jié)構蛋白)／CDl4結(jié)合細胞表面，進而通過某種未知的方式作用于TLR4，通過TLR4將LPS的信號轉(zhuǎn)導至細胞內(nèi)。蛋白激酶C(PKC)作用于IKB

5、，磷酸化的IKB迅速釋放并分解一種小分子蛋白NF-KB，該蛋白為許多細胞的核轉(zhuǎn)錄因子，NF．KB活化后，可增強TNFQ和IUB的基因轉(zhuǎn)錄，使TNFQ和ILlβ產(chǎn)生和釋放增多，進而TNFa和ILlB再次激活NF-KB；NF-KB活化后還可使IL-6和IL-8產(chǎn)生和釋放增多，導致最初的炎癥信號進一步放大。因此，機體可以通過LPS-TLR4-NF-kappaB途徑產(chǎn)生系列的免疫應答。 本實驗通過對免疫肝損傷小鼠體內(nèi)給予頭孢地嗪處理，加

6、強其免疫調(diào)節(jié)作用的研究，探索其在體內(nèi)細胞信號轉(zhuǎn)導途徑，以探討頭孢地嗪的藥理作用機制。 材料與方法： 實驗動物Balb／c小鼠，6-8周齡，雌性，體重19-21g，購于鄭州大學動物實驗中心。本試驗采用卡介苗聯(lián)合脂多糖誘導法，首先建立免疫性肝損傷的小鼠模型，然后將大腸埃希菌腹腔注射來建立免疫性肝損傷合并敗血癥小鼠模型；分設CDZM500mg／kg組、CDZM200mg／kg組、CDZM50mg／kg組、Thy組、CRO組和N

7、S組，每組21只；將小鼠按上述分組進行完全隨機實驗設計，連續(xù)用藥7d后停藥，在第7d、第14d和第2ld分別取7只小鼠收集肝臟和脾臟。 將收集的肝臟進行石蠟包埋，根據(jù)免疫組化SP法常規(guī)步驟進行染色。觀察TLR4、PKC、NF-rB在肝臟中的表達變化，根據(jù)染色強度和陽性細胞數(shù)進行綜合評定，并對結(jié)果進行統(tǒng)計分析。 將收集的脾臟采用RT-PCR技術，對小鼠脾臟淋巴細胞中TLR4、NF-KBmRNA進行半定量分析，并對結(jié)果進行統(tǒng)

8、計學分析。 結(jié)果： 1、免疫組化法： (1)在同一時間，CDZM500mg／kg、CDZM200mg／kg、CDZM50mg／kg、Thy、CRO、NS各組TLR4、PKC、NF-r．B的表達均有統(tǒng)計學差異(p

9、地嗪劑量的增加，TLR4、PKC、NF-r．B的表達均有減少趨勢，但組間差異無統(tǒng)計學意義(p>0．05)； (2)在不同時間，CDZM同一劑量組TLR4、PKC、NF-r．B的表達均無統(tǒng)計學差異(p>O．05)： 2、RT-PCR法： (1)在同一時間，CDZM500mg／kg、CDZM200mg／kg、CDZM50mg／kg、Thy、CRO、NS各組TLR4、NF-r．B的表達有統(tǒng)計學差異(p<0．01)；在同