瑞香素抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、目的：探討瑞香素的體內(nèi)、外抗腫瘤作用及其對荷瘤小鼠免疫功能的影響，為瑞香素的藥用開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。 方法：1.金邊瑞香提取物--E002（瑞香黃烷-Ⅰ）、E003（瑞香素）體外抑瘤實驗，采用MTT法檢測不同濃度E002、E003對人肝癌SMMC-7721細胞和人乳腺癌MCF-7細胞增殖的影響；2.瑞香素對荷瘤小鼠體內(nèi)抑瘤實驗及免疫功能的影響：①建立荷S180瘤小鼠模型；②動物分組及用藥：隨機分為6組a）健康對照組；b）瑞香素高劑

2、量組（4mg/kg）；c）瑞香素中劑量組（2mg/kg）；d）瑞香素低劑量組（1mg/kg）；e）荷瘤對照組；f）環(huán)磷酰胺組（100mg/kg）。瑞香素各劑量組每鼠每天腹腔注射不同劑量瑞香素0.2ml，共10天；環(huán)磷酰胺組每鼠分別于第1、5、9天腹腔注射100mg/kg CY（環(huán)磷酰胺）0.2ml。荷瘤對照組和健康對照組每鼠每天腹腔注射生理鹽水0.2ml，共10天；③檢測如下指標：a）荷S180瘤小鼠體內(nèi)抑瘤作用，解剖分離皮下瘤塊，稱重

3、，計算抑瘤率；b）RT-PCR法檢測瑞香素對荷瘤小鼠細胞因子IL-2和IL-4mRNA表達的影響；c）MTT法檢測瑞香素對荷瘤小鼠NK和LAK細胞活性的影響；d）MTT法檢測瑞香素對ConA誘導(dǎo)的荷瘤小鼠脾T淋巴細胞增殖的影響；e）紅細胞C3b受體花環(huán)（RBC-C3bRR）法檢測瑞香素對荷瘤小鼠紅細胞免疫功能的影響。 結(jié)果：1.①E002（瑞香黃烷-Ⅰ）、E003（瑞香素）濃度（μg/ml）為：250、125、62.5、31.2

4、5、15，62、7.81、3，90、1.95時，作用SMMC-7721細胞，E002抑制率（％）分別為：85.13±3.72、83.06±0.56、80.88±1.67、74.23±1.12、67.63±0.90、62.58±1.09、56.15±1.68、50.8±0.63；E003抑制率（％）分別為：86.9±2.23、83.4±2.47、80.35±2.22、78.01±0.41、74.53±3.46、69.05±2.83、60.

5、01±2.68、51.46±1.63；②E002濃度（μg/ml）為：250、125、62.5時，作用于MCF-7細胞，E002抑制率（％）分別為：72.3±2.10、54.31±2.43、52.48±1.65；E003對MCF-7細胞增殖抑制作用不明顯；③E002作用于SMMC-7721和MCF-7細胞的IC50值（μg/ml）分別為：1.96±0.03和22.89±3.04；E003作用于SMMC-7721細胞的IC50值（μg/m

6、l）為：1.23±0.11；2.瑞香素高、中、低劑量組瘤重均顯著低于荷瘤對照組（P<0.05）；瑞香素高、中、低劑量組均能明顯抑制腫瘤生長，抑瘤率分別為80.28％、71.18％、41.19％，抑瘤率隨瑞香素劑量的增加而增高；3.瑞香素高、中劑量組細胞因子IL-2mRNA表達量顯著高于荷瘤對照組（P<0.05），而IL-4mRNA表達量則顯著低于荷瘤對照組（P<0.05）；荷瘤對照組與健康對照組比，IL-2mRNA的表達量下降，而IL-

7、4mRNA的表達量升高，呈現(xiàn)出Th2型為主的應(yīng)答狀態(tài)；環(huán)磷酰胺組與荷瘤對照組比較，IL-2mRNA表達量無顯著性差異（P>0.05）。4.瑞香素高、中、低劑量組NK、LAK細胞殺傷率顯著高于荷瘤對照組和環(huán)磷酰胺組（P<0.05）；高劑量組與健康對照組比無顯著性差異（P>0.05）；環(huán)磷酰胺組則大大降低了NK、LAK細胞殺傷活性，顯著低于健康對照組和荷瘤對照組（P<0.05）。5.瑞香素高、中、低劑量組ConA誘導(dǎo)的T淋巴細胞增殖刺激指數(shù)

8、顯著高于荷瘤對照組和環(huán)磷酰胺組（P<0.05）；環(huán)磷酰胺組則明顯降低了ConA誘導(dǎo)的T淋巴細胞增殖刺激指數(shù)，顯著低于荷瘤對照組和健康對照組（P<0.05）。6.瑞香素高、中劑量組明顯提高了紅細胞C3b受體花環(huán)率（RBC-C3bRR），與荷瘤對照組和環(huán)磷酰胺組比有顯著性差異（P<0.05），其中高劑量組與健康對照組比無顯著性差異（P>0.05）；而環(huán)磷酰胺組則降低了紅細胞C3b受體花環(huán)率，顯著低于健康對照組（P<0.05），與荷瘤對照組比

9、無顯著性差異（P>0.05）。 結(jié)論：本研究首次對金邊瑞香提取物E002（瑞香黃烷-Ⅰ）抗腫瘤作用和E003（瑞香素）體內(nèi)抗腫瘤作用進行研究。1.E002金邊瑞香提取物：瑞香素和瑞香黃烷-Ⅰ在0.12～250μg/ml范圍內(nèi)對體外生長的SMMC-7721細胞生長均有不同程度的抑制作用，且呈現(xiàn)良好的劑量依賴性；瑞香黃烷-Ⅰ在0.12～250μg/ml范圍內(nèi)對體外生長的MCF-7細胞生長有抑制作用，亦呈現(xiàn)良好的劑量依賴性。2.瑞香素