腎上腺髓質(zhì)增生發(fā)病機制的初步研究.pdf

1、目的:腎上腺髓質(zhì)增生(Adrenal Medulla Hyperplasia,AMH)是近30年來逐漸被人們認識的一種少見疾病,臨床表現(xiàn)為以高血壓為主的綜合癥.其病因及發(fā)病機制尚不清楚.有研究表明,酪氨酸羥化酶(TH)在腎上腺髓質(zhì)增生發(fā)病機制中起重要作用.通過對腎上腺髓質(zhì)增生大鼠模型腎上腺組織酪氨酸羥化酶基因表達水平的研究探討酪氨酸羥化酶蛋白在腎上腺髓質(zhì)增生大鼠腎上腺組織中的表達與腎上腺髓質(zhì)增生的關(guān)系及腎上腺髓質(zhì)增生發(fā)生的分子機理.方法

2、:Wistar大鼠隨機分為2組:正常對照組(NC組)和腎上腺髓質(zhì)增生組(AMH組).正常對照組,每只大鼠皮下注射0.9﹪的生理鹽水1ml·kg<'-1>·d<'-1>,共6周.AMH組為腎上腺髓質(zhì)增生組,按王衛(wèi)星介紹的方法復(fù)制腎上腺髓質(zhì)增生大鼠動物模型:每只大鼠皮下注射0.1﹪的利血平1ml·kg<'-1>·d<'-1>,共6周.從第6周開始隔日收集大鼠24h尿液.6周后下腔靜脈穿刺采血,3000r/min離心制備血清.氯胺酮50mg·

3、kg<'-1>腹腔注射麻醉,取出腎上腺組織10﹪中性甲醛固定,石蠟包埋.免疫組化S-P法測定酪氨酸羥化酶蛋白在正常對照組和腎上腺髓質(zhì)增生組大鼠腎上腺組織中的表達.合成酪氨酸羥化酶探針,用原位雜交法檢測腎上腺組織酪氨酸羥化酶基因mRNA的表達,應(yīng)用高清晰彩色病理圖象測量系統(tǒng)(HPIAS-1000)進行免疫組織化學(xué)圖象分析測定酪氨酸羥化酶免疫組織化學(xué)染色陽性反應(yīng)物和原位雜交信號的平均積分光密度值(IDP).用高效液相色譜分析儀檢測大鼠24h

4、尿液3-甲氧4-羥基苦杏仁酸(VMA)含量和血清中NE、E的含量.結(jié)果:腎上腺髓質(zhì)增生大鼠模型腎上腺組織酪氨酸羥化酶蛋白質(zhì)及mRNA表達均明顯增強,血清中的NE、E和24小時尿3-甲氧4-羥基苦杏仁酸(VMA)的含量明顯升高.并且TH蛋白的表達與血清中的NE、E和24小時尿VMA的含量呈正相關(guān)(r=0.895,0.646,0.667,P<0.01).結(jié)論:腎上腺髓質(zhì)增生大鼠模型腎上腺組織酪氨酸羥化酶基因表達增強,且酪氨酸羥化酶的mRNA