急、慢性咬合干擾致雌性大鼠咀嚼肌痛覺敏感及肌纖維表型轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、顳下頜關(guān)節(jié)紊亂?。╰emporomandibulardisorders,TMD）可累及咀嚼肌和顳下頜關(guān)節(jié)（temporomandibularjoint,TMJ）及其周圍軟組織，以女性多見，臨床上主要表現(xiàn)為顳下頜關(guān)節(jié)彈響、口頜面部疼痛、下頜運動障礙等?？陬M面疼痛和TMD與軀體及神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)的病理狀態(tài)或病癥密切相關(guān)，這一組疾病屬于口頜面區(qū)域非牙源性疼痛，并且作為骨骼肌紊亂病的一個亞類。目前關(guān)于顳下頜關(guān)節(jié)紊亂病咀嚼肌疼痛的原因以及其與咬合異常

2、之間的關(guān)系尚存在巨大的爭議。
　　本研究以雌性Sprague-Dawley（SD）大鼠為實驗對象，首先建立了急、慢性咬合干擾動物模型，然后以行為學(xué)研究方法檢測各組大鼠施加咬合干擾前后雙側(cè)顳肌和咬肌的機械壓痛敏感度（痛敏分值），最后采用免疫組織化學(xué)方法研究雙側(cè)咬肌內(nèi)肌球蛋白重鏈表達(dá)變化情況。
　　1實驗方法
　　1.1大鼠咬合干擾模型的建立方法
　　1.1.1急性咬合干擾：截取一1.5mm長的5號針管并且夾扁，制成

3、寬約1.0mm，厚約0.5mm的咬合加高裝置，用結(jié)扎絲穿過大鼠左側(cè)上頜第二磨牙近遠(yuǎn)中鄰間隙，將該裝置“8”字形結(jié)扎固定于第二磨牙牙合面上，形成個別后牙的急性咬合干擾。每天檢查，以保證所加咬合干擾沒有脫落，直至實驗結(jié)束。
　　1.1.2慢性咬合干擾：在大鼠左側(cè)上頜第一、二磨牙之間插入一正畸用橡皮筋（3MUnitek,1／8＃），并盡量置于齦側(cè)以避免與對頜牙發(fā)生咬合接觸，然后盡量剪短皮筋以避免影響鄰近軟組織的功能活動。在皮筋彈性力作用

4、下，以第二、第三磨牙為支抗，推第一磨牙向近中移動，約7天后第一磨牙向近中移動達(dá)0.8mm左右，從而形成上、下頜第一磨牙尖窩不吻合的咬合狀態(tài)。每天檢查，以保證所加皮筋沒有脫落，直至實驗結(jié)束。
　　1.2分組情況
　　實驗動物共30只，隨機分為以下5組：（1）急性咬合干擾組（具體方法見上述內(nèi)容）；（2）慢性咬合干擾組（具體方法見上述內(nèi)容）；（3）急性去干擾物組：操作同急性咬合干擾組，在形成急性咬合加高后第10天時卸除加高物；（4

5、）慢性去干擾物組：操作同慢性咬合干擾組，在插入皮筋后第10天時拆除皮筋，使近中移動的第一磨牙自然回位。實驗中觀察，約3～5天后（第14天左右）前移的第一磨牙基本回復(fù)到原來位置；（5）空白對照組：不做任何操作，同環(huán)境下飼養(yǎng)直至取材。
　　1.3行為學(xué)測試方法
　　參照1999年Ren所報道方法，據(jù)vonFrey尼龍毛粗細(xì)和動物痛覺反應(yīng)次數(shù)，確定顳肌和咬肌疼痛分值，對比實驗前后疼痛分值的變化。
　　1.4免疫組織化學(xué)方法檢

6、測
　　采用石蠟切片、免疫組化ABC方法，檢測咬肌肌纖維中肌球蛋白重鏈表達(dá)比例變化及分布規(guī)律。
　　2結(jié)果
　　2.1行為學(xué)結(jié)果
　　急、慢性咬合干擾均可增高顳肌和咬肌痛敏分值（P＜0.05），急性咬合干擾組更明顯，敏感程度由大到小為：干擾側(cè)顳肌、干擾側(cè)咬肌、干擾對側(cè)顳肌（P＜0.05），對干擾對側(cè)咬肌的影響不明顯。干擾側(cè)咬肌和顳肌分別在實施急性咬合干擾第2、第3天，在實施慢性咬合干擾第4、第5天痛敏分值便開始升

7、高，之后痛敏分值持續(xù)增高，于1周左右達(dá)到高峰，最后逐漸回落。但是急性去干擾物組痛敏分值回落速度明顯快于持續(xù)急性咬合干擾組（P＜0.05），而慢性去干擾物組痛敏分值回落速度則明顯慢于持續(xù)慢性咬合干擾組（P＜0.05），干擾對側(cè)顳肌的痛敏分值變化與此類似，但幅度較小。慢性去干擾物組痛敏分值回落較慢的原因可能是前移后復(fù)位的磨牙形成了二次咬合干擾的結(jié)果，而單純前移磨牙的慢性咬合干擾組則由于局部磨耗等代償機制，使得干擾程度自然緩解之緣故。

8、　　2.2免疫組化結(jié)果
　　急、慢性咬合干擾組肌球蛋白重鏈表達(dá)與對照組差異顯著，主要表現(xiàn)為慢性咬合干擾15天組咬肌內(nèi)MHC-Ⅱ的表達(dá)較對照組明顯增加（P＜0.05），急性15天組和慢性15天組之間有統(tǒng)計學(xué)差異，慢性15天比急性15天陽性細(xì)胞數(shù)表達(dá)更明顯（P＜0.05）。左右側(cè)之間無明顯差異（P＞0.05），急、慢性咬合干擾7天組與對照組差異不顯著（P＞0.05），咬合干擾作用時間（7天、15天）對咬肌內(nèi)肌球蛋白重鏈表達(dá)的影響不明顯

9、（P＞0.05），咬肌深、淺層以及前、中、后部各部位之間肌球蛋白重鏈表達(dá)未見有明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。
　　3結(jié)論
　　3.1行為學(xué)方面
　　急、慢性咬合干擾均可致顳肌和咬肌痛覺敏感，急性咬合干擾較慢性咬合干擾影響更為明顯，且急性咬合干擾痛敏出現(xiàn)峰值的時間要早于慢性咬合干擾，去除咬合干擾有助于緩解咀嚼肌痛敏。
　　3.2組織學(xué)方面
　　急、慢性咬合持續(xù)干擾可致咬肌肌纖維表現(xiàn)型比例的轉(zhuǎn)換，含有肌球蛋白