5氮雜胞苷對化療藥長春新堿及環(huán)磷酰氨誘導NB細胞凋亡的調節(jié)作用.pdf

1、目的：神經母細胞瘤(NB)是兒童常見的顱外實體腫瘤之一。年齡超過一歲，伴有N—myc基因擴增的NB患兒預后不佳。目前的治療方法包括外科手術，化療，干細胞移植等療效均不十分理想。其中NB細胞對化療藥耐藥便是其中一個比較突出的問題，因此，如何能夠逆轉NB細胞對化療藥物的耐藥便成為一個熱點問題。 天冬氨酸特異的半胱氨酸蛋白酶(caspase)是一組與細胞因子成熟和細胞凋亡有關的酶，共14種。caspase-8是其中一員，具有強大的凋亡

2、激發(fā)和傳導功能。是NB細胞凋亡通路的重要一環(huán)。根據(jù)國外的相關文獻報道，預后較好，對化療藥敏感的NB細胞都有caspase-8蛋白的表達，相反預后差，對化療藥耐藥的NB細胞則無caspase-8表達。另有文獻報道，NB細胞中caspase-8沉默的主要原因是其基因的超甲基化。 本實驗應用細胞免疫組化染色及MTT細胞毒實驗的方法來檢測去甲基藥5AZA是否可以通過逆轉caspase-8基因的超甲基化來使NB細胞重新表達caspase-

3、8蛋白，以及表達了caspase-8的NB細胞是否能夠恢復對傳統(tǒng)化療藥長春新堿和環(huán)磷酰氨的敏感性。 方法: (1)細胞免疫組化染色方法檢測5AZA是否可以使NB細胞重新表達caspase-8蛋白。 (2)實驗以5AZA培養(yǎng)的細胞為實驗組，未用藥物處理的為對照組，用zlETD—FMK處理的細胞為抑制劑組，通過MTT細胞毒實驗測量細胞經過化療藥作用后的存活率來檢測經5AZA作用而重新表達caspase-8蛋白的NB細

4、胞是否恢復對傳統(tǒng)化療藥物的敏感性。 結果: 通過免疫組化染色的實驗得到的結果是去甲基藥5AZA可以通過逆轉caspase-8基因的超甲基化來使NB細胞重新表達caspase-8蛋白，而MTT細胞毒實驗結果表明5AZA可以通過使SY5Y細胞重新表達Caspase-8蛋白而重新恢復對化療藥長春新堿及環(huán)磷酰胺的敏感性。 結論: 去甲基藥5AZA可以使NB細胞的caspase-8恢復表達，而恢復表達caspase