新型鉀通道開(kāi)放劑QO-58對(duì)血管平滑肌的舒張作用.pdf

1、高血壓是最常見(jiàn)的慢性心血管疾病，嚴(yán)重的高血壓可引起心、腦、腎等多種靶器官的損害，控制高血壓是防治心腦血管疾病的關(guān)鍵。因此，研發(fā)高效、安全的抗高血壓藥十分必要。
　　鉀通道在血管平滑肌上分布廣泛，KCNQ基因編碼的電壓依賴型鉀離子通道(Kv7)可以有效地調(diào)控血管平滑肌的舒縮。QO-58屬吡唑并嘧啶酮類化合物，具有開(kāi)放Kv7鉀離子通道的作用。本研究擬觀察QO-58對(duì)SD大鼠離體小動(dòng)脈血管張力的影響以及對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓和心率的影響

2、，并進(jìn)一步探討其作用機(jī)制，為高血壓的治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　一、新型鉀通道開(kāi)放劑QO-58對(duì)SD大鼠離體小動(dòng)脈血管張力的影響
　　目的:觀察QO-58對(duì)大鼠腸系膜小動(dòng)脈、腎臟小動(dòng)脈、基底動(dòng)脈和冠狀動(dòng)脈血管張力的影響，并探討其作用機(jī)制。
　　方法:采用微血管張力測(cè)定儀記錄大鼠離體腸系膜小動(dòng)脈、腎臟小動(dòng)脈、基底動(dòng)脈和冠狀動(dòng)脈在氯化鉀(KCl)或新福林（PHE）預(yù)收縮時(shí)QO-58對(duì)血管張力的影響，并與硝苯地平的舒血管作

3、用相比較，此外，還觀察Kv7通道阻斷劑XE991對(duì)QO-58作用的影響。采用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)SD大鼠腸系膜小動(dòng)脈、腎小動(dòng)脈、基底動(dòng)脈和冠狀動(dòng)脈血管KCNQ4RNA的含量。
　　結(jié)果:
　　1.QO-58對(duì)腸系膜小動(dòng)脈血管的舒張作用QO58在1μmol/L～300μmol/L范圍內(nèi)濃度依賴性地舒張60 mmol/LKCl預(yù)收縮以及60 mmol/L KCl和10μmol/L XE991共同預(yù)收縮的腸系膜小動(dòng)脈，EC50分

4、別為（19.1±1.0）μmol/L、（18.4±3.1）μmol/L，二者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。給予XE991后100μmol/L、300μmol/L QO-58的舒血管作用與未加入XE991相比明顯降低(P＜0.01，P＜0.05)，提示XE991可降低QO-58擴(kuò)血管作用的效能。
　　QO58在1μmol/L～100μmol/L范圍內(nèi)濃度依賴性地舒張10μmol/LPHE預(yù)收縮以及10μmol/L PHE和10μmo

5、l/L XE991共同預(yù)收縮的腸系膜小動(dòng)脈，EC50分別為（3.3±0.3）μmol/L、（5.77±0.25）μmol/L，二者相比有明顯差異(P＜0.05);給予XE991后1μmol/L、3μmol/L QO-58的舒血管作用與未加入XE991相比明顯降低(P＜0.01)且量效曲線右移，提示XE991可降低QO-58擴(kuò)血管作用的效價(jià)強(qiáng)度。
　　QO58在1μmol/L～300μmol/L范圍內(nèi)濃度依賴性地舒張120 mmol

6、/LKCl預(yù)收縮的腸系膜小動(dòng)脈，EC50為（17.97±1.58）mol/L，與60 mmol/LKCl預(yù)收縮的EC50（19.1±1.0）μmol/L相比，無(wú)明顯差異（P＞0.05），但是30μmol/L、100μmol/L、300μmol/L QO-58的血管舒張率與60 mmol/LKCl預(yù)收縮相比明顯降低(P＜0.01，P＜0.05)，提示增加細(xì)胞外K+濃度，提高K+平衡電位，抑制QO-58擴(kuò)血管作用。
　　QO58舒張6

7、0 mmol/L KCl預(yù)收縮的腸系膜小動(dòng)脈的量效曲線與10μmol/L PHE預(yù)收縮相比明顯右移(P＜0.01)，提示細(xì)胞外高K+，可減弱QO-58擴(kuò)血管作用。
　　硝苯地平在1×10-4μmol/L～10μmol/L范圍內(nèi)濃度依賴性地舒張60mmol/L KCl預(yù)收縮的腸系膜小動(dòng)脈，EC50為（3.5±0.4）nmol/L，與QO-58相比明顯減小(P＜0.01)，硝苯地平舒張腸系膜小動(dòng)脈的效價(jià)強(qiáng)度大于QO-58。
　　

8、2.O-58對(duì)腎臟小動(dòng)脈血管張力的舒張作用QO58在1μmol/L～300μmol/L范圍內(nèi)濃度依賴性地舒張60 mmol/LKCl預(yù)收縮以及60 mmol/L KCl和10μmol/L XE991共同預(yù)收縮的腎臟小動(dòng)脈，EC50分別為（55.0±21.7）μmol/L、（56.3±5.0）μmol/L。給予XE991后10、30、300μmol/L QO-58的舒血管作用與未加入XE991相比明顯降低（P＜0.05），量效曲線右移，提

9、示XE991可降低QO-58擴(kuò)血管作用的效能。
　　QO58在1μmol/L～100μmol/L范圍內(nèi)濃度依賴性地舒張1μmol/L PHE預(yù)收縮以及1μmol/L PHE和10μmol/L XE991共同預(yù)收縮的腎臟小動(dòng)脈，EC50分別為（6.25±1.04）μmol/L、（23.4±1.19）μmol/L，給予XE991后1μmol/L、3μmol/L、10μmol/L、30μmol/L、100μmol/L QO-58的舒血管

10、作用與未加入XE991相比明顯降低(P＜0.01);其量效曲線明顯右移，提示XE991可降低QO-58舒張腎臟小動(dòng)脈的作用的效能和效價(jià)強(qiáng)度。
　　QO58對(duì)60 mmol/L KCl預(yù)收縮的腎臟小動(dòng)脈的舒張量效曲線，與10μmol/L PHE預(yù)收縮相比明顯右移(P＜0.01)，提示細(xì)胞外高K+，可減弱QO-58擴(kuò)血管作用。
　　QO58在1μmol/L～100μmol/L范圍內(nèi)可濃度依賴性地舒張1μmol/LPHE預(yù)收縮的自

11、發(fā)性高血壓大鼠的腎臟小動(dòng)脈，EC50為（5.28±0.78）μmol/L，與SD大鼠EC50（6.25±1.04）μmol/L相比，明顯降低(P＜0.05)。提示QO58對(duì)SHR更敏感。
　　硝苯地平在1×10-4μmol/L～10μmol/L范圍內(nèi)濃度依賴性地舒張1μmol/L PHE預(yù)收縮的腎臟小動(dòng)脈，EC50為（38.0±2.6）nmol/L，與QO-58相比明顯減?。≒＜0.01），硝苯地平舒張腎臟小動(dòng)脈的效價(jià)強(qiáng)度大于QO

12、-58。
　　3.QO-58對(duì)腦基底動(dòng)脈血管的舒張作用QO58在1μmol/L～100μmol/L范圍內(nèi)濃度依賴性地舒張60 mmol/LKCl預(yù)收縮以及60 mmol/L KCl和10μmol/L XE991共同預(yù)收縮的基底動(dòng)脈，EC50分別為（26.4±3.4）μmol/L、（26.4±0.6）μmol/L;給予XE991后3、10μmol/L QO-58的舒血管作用與未加入XE991相比明顯降低(P＜0.05)，提示XE99

13、1可抑制QO-58的舒血管作用。
　　硝苯地平在1×10-4μmol/L～10μmol/L范圍內(nèi)濃度依賴性地舒張60mmol/L KCl預(yù)收縮的基底動(dòng)脈，EC50為（12.6±3.6）nmol/L，與QO-58相比明顯減小(P＜0.01)，硝苯地平舒張基底動(dòng)脈的效價(jià)強(qiáng)度大于QO-58。
　　4.QO-58對(duì)冠狀動(dòng)脈血管張力的影響QO58在10μmol/L～1mmol/L范圍內(nèi)濃度依賴性地舒張60 mmol/L KCl預(yù)收縮以

14、及60 mmol/L KCl和10μmol/L XE991共同預(yù)收縮的冠狀動(dòng)脈，EC50分別為（105.8±0.7）μmol/L、(107.0±5.2)μmol/L;給予XE991后300μmol/L和1mmol/L QO-58的舒血管作用與未加入XE991相比明顯降低(P＜0.05)，提示XE991可抑制高濃度QO-58舒張冠狀動(dòng)脈作用。
　　硝苯地平在1×10-4μmol/L～1×10-1μmol/L范圍內(nèi)濃度依賴性地舒張60

15、 mmol/L KCl預(yù)收縮的冠狀動(dòng)脈，EC50為（6.39±0.34）nmol/L，與QO-58相比明顯減小(P＜0.01)，硝苯地平舒張冠狀動(dòng)脈的效價(jià)強(qiáng)度大于QO-58。
　　5.比較SD大鼠腸系膜小動(dòng)脈、腎小動(dòng)脈、基底動(dòng)脈和冠狀動(dòng)脈血管KCNQ4 RNA的含量與SD大鼠冠狀動(dòng)脈KCNQ4 mRNA（Ct為11.21±0.27）相比，腸系膜小動(dòng)脈、腎臟小動(dòng)脈、基底動(dòng)脈KCNQ4 mRNA明顯增多(P＜0.01，P＜0.05)，

16、 Ct值分別為9.29±0.29;9.48±0.72;10.42±0.40。KCNQ4 mRNA的含量:腸系膜小動(dòng)脈＞腎臟小動(dòng)脈＞基底動(dòng)脈＞冠狀動(dòng)脈，此結(jié)果與QO58擴(kuò)張上述血管的效價(jià)強(qiáng)度一致，再次證明QO58擴(kuò)血管作用與開(kāi)放Kv7.4鉀離子通道有關(guān)。
　　結(jié)論:QO-58可濃度依賴性地?cái)U(kuò)張預(yù)收縮的SD大鼠腸系膜小動(dòng)脈、腎臟小動(dòng)脈、基底動(dòng)脈和冠狀動(dòng)脈，其擴(kuò)血管作用與開(kāi)放Kv7鉀通道有關(guān)。
　　二、新型鉀通道開(kāi)放劑QO-58對(duì)

17、自發(fā)性高血壓大鼠血壓和心率的影響
　　目的:觀察QO-58對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）血壓和心率的影響。
　　方法:實(shí)驗(yàn)分為10組:其中SHR分為9組，分別為QO-581.25mg/kg、2.5 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg組、QO-581.25mg/kg+硝苯地平1mg/kg組、QO-582.5mg/kg+硝苯地平1mg/kg組、陽(yáng)性對(duì)照硝苯地平1mg/kg組和瑞替加濱5mg/kg組、溶劑對(duì)照組;SD大鼠Q

18、O-585 mg/kg組。采用單次靜脈注射給藥方式，應(yīng)用無(wú)創(chuàng)鼠尾血壓測(cè)定方法，觀察QO-58對(duì)SHR和SD大鼠血壓和心率的影響。
　　結(jié)果:
　　1.QO-58對(duì)心率的影響與給藥前相比，QO582.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg可劑量依賴性地減慢SHR心率(P＜0.05，P＜0.01);硝苯地平1mg/kg明顯加快心率;瑞替加濱5 mg/kg明顯減慢心率(P＜0.01);溶劑組給藥前后心率無(wú)明顯差異(P＞0.05

19、)。QO-585mg/kg對(duì)SD大鼠心率無(wú)明顯影響(P＞0.05)，提示QO-58可降低SHR的心肌耗氧量，從而保護(hù)心臟。
　　以△心率=給藥后心率-給藥前心率作為觀察指標(biāo)，與溶劑對(duì)照組(-7.3±7.3)次/分相比，QO-585 mg/kg組和瑞替加濱5mg/kg組心率明顯減慢(P＜0.01)，△心率分別為（-56.6±9.2）次/分和（-67.4±11.7）次/分;硝苯地平1mg/kg組心率明顯加快(P＜0.05)，△心率為（

20、18.4±4.7）次/分;QO-581.25 mg/kg、2.5 mg/kg、10 mg/kg有減慢心率的趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。與硝苯地平組相比，硝苯地平分別與QO-581.25 mg/kg和2.5mg/kg合用，可使心率加快的作用有所減弱，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　2.QO-58對(duì)收縮壓的影響與給藥前相比，QO-58可劑量依賴性地降低SHR收縮壓;瑞替加濱5mg/kg和硝苯地平1 mg/kg、QO-5

21、81.25 mg/kg與硝苯地平1 mg/kg合用、QO-582.5 mg/kg與硝苯地平1 mg/kg合用均可明顯降低SHR收縮壓(P＜0.01);溶劑對(duì)照組對(duì)SHR收縮壓無(wú)明顯影響(P＞0.05);QO-585mg/kg對(duì)SD大鼠收縮壓無(wú)明顯影響(P＞0.05)。
　　以△收縮壓=給藥后收縮壓-給藥前收縮壓作為觀察指標(biāo)，與溶劑對(duì)照組(-0.3±2.6)mmHg相比,QO-582.5mg/kg和10 mg/kg、QO-581.2

22、5 mg/kg與硝苯地平合用、QO-582.5mg/kg與硝苯地平合用、陽(yáng)性對(duì)照藥硝苯地平、瑞替加濱均可明顯降低SHR收縮壓(P＜0.05，P＜0.01)，△收縮壓分別為(-21.5±5.1)mmHg、(-20.8±2.6) mmHg、（-22.9±5.3)mmHg、(-25.5±4.7) mmHg、(-32.2±6.4)mmHg、(-38.8±4.5)mmHg;QO-581.25mg/kg和5 mg/kg有降低收縮壓趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差

23、異(P＞0.05)。
　　3.QO-58對(duì)SHR舒張壓的影響與給藥前相比，QO-585mg/kg和10 mg/kg、瑞替加濱5 mg/kg、硝苯地平1 mg/kg、硝苯地平1 mg/kg與QO-581.25mg/kg合用、硝苯地平1mg/kg與QO-582.5mg/kg合用均可明顯降低SHR的舒張壓(P＜0.05，P＜0.01);QO-581.25mg/kg和2.5mg/kg、溶劑對(duì)SHR舒張壓無(wú)明顯影響(P＞0.05)。QO-5

24、85mg/kg對(duì)SD大鼠舒張壓無(wú)明顯影響(P＞0.05)。
　　以△舒張壓=給藥后舒張壓-給藥前舒張壓作為觀察指標(biāo)，與溶劑對(duì)照組（-3.4±2.8）mmHg相比，QO-5810 mg/kg、瑞替加濱5 mg/kg、硝苯地平1 mg/kg可明顯降低SHR舒張壓(P＜0.05，P＜0.01)，△舒張壓分別為（-28.2±5.3）mmHg、（-46.2±6.4）mmHg、（-29.5±5.9）mmHg;其余各組與溶劑組相比無(wú)明顯差異(P