版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、目的:布?。˙rucellosis)是一種嚴重危害人和動物健康的人獸共患傳染病。巨噬細胞是布魯菌生存和繁殖的靶細胞之一,布魯菌的胞內生存與抑制宿主細胞凋亡有關,外膜蛋白 OMP25(Outer Membrane Protein25)在布魯菌的毒力及胞內寄生中起重要作用。前期,本課題組應用噬菌體展示技術篩選出與布魯菌OMP25特異性結合的42個環(huán)形七肽,通過生物信息學分析,LT-7C與鋅指蛋白ZNF446(Zinc Finger Prot
2、ein Peptide446)對應區(qū)域有100%的同源性。本研究以布魯菌RB51(Brucella abortus strain RB51)侵染THP-1(human leukemia cell line)細胞,研究LT-7C在不同階段對MAPK通路(MAPK signal pathway)的影響,進而探討LT-7C對細胞凋亡的影響。
方法:
本研究利用合成的環(huán)形七肽與THP-1共孵育,采用MTT法進行多肽的毒性檢測
3、,選擇合適的七肽濃度與THP-1共孵育,實驗設未感染組和感染組,包括未感染對照組、未感染線性七肽組、未感染環(huán)形七肽組、感染對照組、感染線性七肽組和感染環(huán)形七肽組。以MOI(multiplicity of infection)為50:1建立RB51感染THP-1細胞的感染模型。分別收集4、8、12、24h和48h的感染細胞,利用流式細胞儀檢測不同時間段的早期凋亡率;感染4h和48h時,曲拉通裂解細胞,進行細胞內布魯菌計數(shù);采用qRT-PC
4、R技術和Western blot檢測4h和48h MAPK通路中ERK1/2、JNK1/2、P38的mRNA水平和蛋白的表達變化。
結果:
(1)合成的環(huán)形七肽對THP-1無毒副作用;
(2)流式細胞術檢測顯示:在未感染組中環(huán)形七肽組和線性七肽組與對照組比較早期凋亡率隨著時間的變化呈上升趨勢,統(tǒng)計學分析各組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);在感染組中環(huán)形七肽組和線性七肽組與感染對照組比較12h前呈上升趨勢,
5、12h后呈下降趨勢,其中4h時感染環(huán)形組高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);48h時感染環(huán)形組低于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
(3)CFU計數(shù)結果顯示感染環(huán)形七肽組早期4h時胞內細菌量低于感染對照組,并且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);線性七肽組4h胞內含菌量高于感染對照組,差異無統(tǒng)計學意義;48h時各組差異無統(tǒng)計學意義。
(4) qRT-PCR檢測結果顯示4h時感染線性組LT-7組和感染
6、環(huán)形LT-7C組erk1的拷貝數(shù)低于感染對照組,ekr2、p38、jnk1和jnk2拷貝數(shù)在各感染組無變化,未感染組4h時各基因的拷貝數(shù)無變化;48h時感染環(huán)形組中jnk1/2拷貝數(shù)低于感染對照組;erk1、ekr2、p38拷貝數(shù)在各感染組無變化,未感染組48h時各基因的拷貝數(shù)無變化;
?。?)Western blot結果與qRT-PCR一致。
結論:
(1)以MOI為50:1的RB51感染的環(huán)形七肽組中,環(huán)
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 布魯菌SahH在甲硫氨酸代謝通路中的活性研究.pdf
- 氧化應激下傷寒沙門菌對THP-1細胞凋亡影響的研究.pdf
- LTB4在THP-1源性巨噬細胞中通過MAPK途徑上調EMMPRIN的表達.pdf
- LPS對THP-1細胞CD14表達的影響.pdf
- MAPK-PPARα-γ交互串聯(lián)信號通路在肺炎衣原體誘導THP-1源性泡沫細胞形成中的作用及機制研究.pdf
- 游離脂肪酸對THP-1巨噬細胞NALP3炎性通路的影響.pdf
- 巨噬細胞微粒通過激活MAPK信號通路誘導THP-1細胞產生IL-8.pdf
- 傷寒沙門菌質粒對巨噬細胞THP-1自噬、凋亡和炎癥反應的影響.pdf
- HMGB1-A box對SW480和THP-1細胞LPS-TLR4信號通路的影響.pdf
- CXCR7在急性單核細胞白血病中的表達及對THP-1細胞功能的影響.pdf
- 幾種化合物對THP-1細胞TLR-4信號傳導通路相關因子的影響.pdf
- PI3K-AKT信號通路在THP-1細胞中對NLRP3炎癥小體的調節(jié)作用.pdf
- 肺炎鏈球菌溶血素誘導THP-1細胞凋亡涉及p38MAPK信號通路的激活.pdf
- AngⅡ、Ang1-7對THP-1巨噬細胞PPARγ、LXRα表達的影響及其相互作用.pdf
- 青藤堿對THP-1源性泡沫細胞活性影響及NF-κB信號通路機制研究.pdf
- 苦瓜蛋白對THP-1源性巨噬細胞泡沫化的影響.pdf
- 原花青素對LPS誘導的THP-1細胞的影響作用研究.pdf
- JAK-STAT信號通路在腸道病毒71型感染THP-1細胞中的作用機制.pdf
- IL-37對THP-1源巨噬細胞泡沫化的影響.pdf
- CRP和HDL對THP-1來源的巨噬細胞LOX-1表達的影響及其相關信號轉導通路研究.pdf
評論
0/150
提交評論