馬鏈球菌HA高產(chǎn)菌株選育及生產(chǎn)工藝初步研究.pdf

1、本研究對(duì)馬疫鏈球菌誘變后，篩選出不產(chǎn)溶血素的透明質(zhì)酸(hyaluronicacid，簡稱HA)高產(chǎn)菌株，優(yōu)化了發(fā)酵條件，并初步確定提取工藝，為今后深入研究奠定了一定基礎(chǔ)。 經(jīng)NTG誘變，篩選出不產(chǎn)生溶血素的菌株，多次誘變后得到相對(duì)較高產(chǎn)量的菌株。 最佳碳源為葡萄糖，最佳氮源為酵母膏和牛肉膏的混合氮源，酵母膏和牛肉膏的比值為4∶1，最佳碳氮比為2∶1，葡萄糖最佳濃度為45g/L，牛肉膏和酵母膏總濃度為22.5g/L，MgS

2、O4濃度為1.5g/L，NaHCO3濃度為7g/L，最佳溫度為36℃，PH為7.0，接種量為13％，裝液量為40％，發(fā)酵時(shí)間為42h.在0-16h，搖瓶轉(zhuǎn)速為150r/m,16-30h轉(zhuǎn)速為200r/m,30-42h為300r/m，起始葡萄糖的加入量為35g/L,在16-30h加入15g/L的葡萄糖，30-42h加入5g/L的葡萄糖，透明質(zhì)酸的產(chǎn)量達(dá)到0.825g/L。 提取透明質(zhì)酸時(shí)，無水乙醇的最佳添加量為3.25L/L,乙醇

3、靜置時(shí)間為20h，在分級(jí)分離純化透明質(zhì)酸時(shí)，最佳的NaCl濃度為0.35mol/L，除去蛋白的最佳的氯仿用量1.5L/L。 紫外和紅外光譜分析鑒定了精制的樣品，測(cè)定純度為65％，其分子量為1.01×106。在5L發(fā)酵罐中發(fā)酵，透明質(zhì)酸產(chǎn)量達(dá)到了0.952g/L。 發(fā)酵法生產(chǎn)透明質(zhì)酸研究所用的出發(fā)菌株為獸疫鏈球菌，本研究采用馬疫鏈球菌作為出發(fā)菌株具有較高的創(chuàng)新意義。透明質(zhì)酸的產(chǎn)量從0.42g/L增加到0.952g/L，達(dá)到