經(jīng)典Wnt信號通路在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)樣細(xì)胞分化中的作用.pdf

1、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是骨髓中不同于造血干細(xì)胞的一類細(xì)胞，其取材簡便，易分離、純化、培養(yǎng)，在一定的條件下可以迅速體外擴增，具有多向分化潛能，可以通過不同的方法被誘導(dǎo)分化成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞等，而且它具有低免疫源性，向病變部位遷移的能力，并與局部的組織有良好的整合性，若能探明其向神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的機制，精確調(diào)控細(xì)胞的分化、遷移、功能改變等，神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療必能進(jìn)入個全新境界。目前干細(xì)胞分化機制傾向于通過多條信號通路

2、來調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。Wnt信號通路調(diào)節(jié)控制著許多生命過程，包括生物體的生長、發(fā)育、疾病、衰老與死亡等；也包括細(xì)胞形態(tài)與功能的分化與維持、免疫、應(yīng)激、細(xì)胞癌變與細(xì)胞凋亡等。目前發(fā)現(xiàn)其經(jīng)典Wnt信號通路可作用于目前所有已確定的人體的干細(xì)胞，但其作用卻由于細(xì)胞的種類和狀態(tài)而不同。在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)樣細(xì)胞分化過程中，經(jīng)典Wnt信號通路究竟起著什么作用，機制有待進(jìn)一步研究。
　　 目的：本研究通過誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)樣細(xì)胞分化，

3、并檢測經(jīng)典Wnt信號通路重要分子變化情況，以期明確經(jīng)典Wnt信號通路對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的作用，并為其具體作用機制研究奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：1、通過貼壁法分離培養(yǎng)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。2、取P5代細(xì)胞種植于6孔板，用10ng/ml bFGF預(yù)誘導(dǎo)24小時后，改為10ng/ml bFGF+10ng/mlEGF+0.5ug/ml RA誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)細(xì)胞向神經(jīng)樣細(xì)胞分化。并設(shè)立不同種植密度組，選擇最適合分化種植密度。3、采用實

4、時定量PCR方法，檢測誘導(dǎo)前和誘導(dǎo)后1，3，5天Wnt3變化情況，并設(shè)立空白組對比。
　　 結(jié)果：1、通過貼壁法分離培養(yǎng)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，5代后細(xì)胞呈均一梭形漩渦樣生長，免疫組化鑒定CD34-，CD45-，CD90+。2、細(xì)胞加入誘導(dǎo)劑后出現(xiàn)胞體回縮，突觸變長出現(xiàn)二級突觸，并連接成網(wǎng)的現(xiàn)象。Nestin，GFAP，NSE細(xì)胞化學(xué)染色均呈陽性，8×103個/cm2為最佳分化種植密度。3、空白組和處理組Wnt3分子表達(dá)比較，