經(jīng)典Wnt信號通路在骨髓間充質(zhì)干細胞分化為成牙本質(zhì)樣細胞中的作用體外實驗研究.pdf

1、各種原因?qū)е碌难例X缺損或缺失仍是目前很常見的牙科疾患，而傳統(tǒng)的治療尚具有一些無法避免的遠期礙害。以干細胞為基礎的再生醫(yī)學是未來治療這類疾患的理想模式。牙齒再生的干細胞源分為牙源性干細胞和非牙源性干細胞。牙源性干細胞具有良好的成牙潛能，但是獲取困難限制了牙源性干細胞的應用，因此研究非牙源性干細胞具有了現(xiàn)實意義。骨髓間充質(zhì)干細胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）與牙源性干細胞在細胞生物學特性

2、上有諸多相似之處，且具有取材容易、獲得方便的優(yōu)越性，在骨組織、牙周組織再生等研究中受到廣泛關注。本實驗采用牙胚細胞條件培養(yǎng)液（tooth germ cells conditioned medium,TGC-CM）體外誘導BMSCs，探討其向成牙本質(zhì)樣細胞分化的能力。同時通過干預經(jīng)典Wnt通路，觀察BMSCs牙向分化情況的改變，明確經(jīng)典Wnt通路對BMSCs向成牙本質(zhì)樣細胞分化的調(diào)控作用。
　　實驗分為兩個部分：
　　1．構建

3、骨髓間充質(zhì)細胞向成牙本質(zhì)樣細胞分化體外誘導體系
　　目的：探索BMSCs向成牙本質(zhì)樣細胞分化的能力。
　　方法：TGC-CM誘導SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞7d，應用免疫熒光染色、RT-PCR等方法，檢測誘導后的細胞成牙本質(zhì)細胞特異性標志牙本質(zhì)涎蛋白(DSP)、牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1（DMP-1）表達水平，明確骨髓間充質(zhì)干細胞能否向成牙本質(zhì)樣細胞分化。
　　結果:大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞在誘導體系中生長狀態(tài)良好。培養(yǎng)7d后，部分細胞

4、抗牙本質(zhì)涎蛋白(DSP)、牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1（DMP-1）免疫熒光染色呈陽性；RT-PCR顯示mRNA水平表達牙本質(zhì)涎磷蛋白(DSPP)和牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白(DMP-1)。
　　結論:大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞在牙胚細胞條件培養(yǎng)液的誘導下可以分化為成牙本質(zhì)樣細胞。
　　2．經(jīng)典Wnt信號通路對骨髓間充質(zhì)細胞分化為成牙本質(zhì)樣細胞的調(diào)控作用
　　目的：研究經(jīng)典Wnt信號通路在BMSCs分化為成牙本質(zhì)樣細胞中的調(diào)控作用。
　　方法

5、：應用Wnt3a/Dkk1處理BMSCs48h，Western blot檢測β-catenin水平；應用TGC-CM誘導處理前后的BMSCs7d，免疫熒光及熒光實時定量PCR檢測誘導后細胞成牙本質(zhì)細胞特異性標志牙本質(zhì)涎蛋白(DSP)、牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1（DMP-1）表達情況。
　　結果：Western blot結果顯示W(wǎng)nt3a/Dkk1處理后BMSCs胞核內(nèi)β-catenin水平明顯上調(diào)/下調(diào)；免疫熒光及熒光實時定量PCR結果顯示