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文檔簡介
1、各種原因?qū)е碌难例X缺損或缺失仍是目前很常見的牙科疾患,而傳統(tǒng)的治療尚具有一些無法避免的遠期礙害。以干細胞為基礎的再生醫(yī)學是未來治療這類疾患的理想模式。牙齒再生的干細胞源分為牙源性干細胞和非牙源性干細胞。牙源性干細胞具有良好的成牙潛能,但是獲取困難限制了牙源性干細胞的應用,因此研究非牙源性干細胞具有了現(xiàn)實意義。骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)與牙源性干細胞在細胞生物學特性
2、上有諸多相似之處,且具有取材容易、獲得方便的優(yōu)越性,在骨組織、牙周組織再生等研究中受到廣泛關注。本實驗采用牙胚細胞條件培養(yǎng)液(tooth germ cells conditioned medium,TGC-CM)體外誘導BMSCs,探討其向成牙本質(zhì)樣細胞分化的能力。同時通過干預經(jīng)典Wnt通路,觀察BMSCs牙向分化情況的改變,明確經(jīng)典Wnt通路對BMSCs向成牙本質(zhì)樣細胞分化的調(diào)控作用。
實驗分為兩個部分:
1.構建
3、骨髓間充質(zhì)細胞向成牙本質(zhì)樣細胞分化體外誘導體系
目的:探索BMSCs向成牙本質(zhì)樣細胞分化的能力。
方法:TGC-CM誘導SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞7d,應用免疫熒光染色、RT-PCR等方法,檢測誘導后的細胞成牙本質(zhì)細胞特異性標志牙本質(zhì)涎蛋白(DSP)、牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1(DMP-1)表達水平,明確骨髓間充質(zhì)干細胞能否向成牙本質(zhì)樣細胞分化。
結果:大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞在誘導體系中生長狀態(tài)良好。培養(yǎng)7d后,部分細胞
4、抗牙本質(zhì)涎蛋白(DSP)、牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1(DMP-1)免疫熒光染色呈陽性;RT-PCR顯示mRNA水平表達牙本質(zhì)涎磷蛋白(DSPP)和牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白(DMP-1)。
結論:大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞在牙胚細胞條件培養(yǎng)液的誘導下可以分化為成牙本質(zhì)樣細胞。
2.經(jīng)典Wnt信號通路對骨髓間充質(zhì)細胞分化為成牙本質(zhì)樣細胞的調(diào)控作用
目的:研究經(jīng)典Wnt信號通路在BMSCs分化為成牙本質(zhì)樣細胞中的調(diào)控作用。
方法
5、:應用Wnt3a/Dkk1處理BMSCs48h,Western blot檢測β-catenin水平;應用TGC-CM誘導處理前后的BMSCs7d,免疫熒光及熒光實時定量PCR檢測誘導后細胞成牙本質(zhì)細胞特異性標志牙本質(zhì)涎蛋白(DSP)、牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1(DMP-1)表達情況。
結果:Western blot結果顯示W(wǎng)nt3a/Dkk1處理后BMSCs胞核內(nèi)β-catenin水平明顯上調(diào)/下調(diào);免疫熒光及熒光實時定量PCR結果顯示
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