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1、目的:研究閃爍光誘導(dǎo)性近視眼鞏膜、脈絡(luò)膜、視網(wǎng)膜中乙酰膽堿M1受體的表達(dá),研究不同波長(zhǎng)的閃爍光誘導(dǎo)新生豚鼠形成近視眼的發(fā)生機(jī)制,明確乙酰膽堿M1受體在后極部眼球壁的分布及其在近視形成中的作用。 方法:選擇健康、雙眼屈光度相同、出生15~20天的豚鼠24只,隨機(jī)分為6組,每組4只;Ⅰ組用紅色閃爍光照射,Ⅱ組用黃色閃爍光照射,Ⅲ組用綠色閃爍光照射,Ⅳ組用白色閃爍光照射,以上四組均放在完全密閉的紙箱中飼養(yǎng),Ⅴ組用正常自然光照射,放在四
2、周密閉而上方開(kāi)放的紙箱中飼養(yǎng),Ⅵ組用正常自然光照射,放在視野開(kāi)闊的籠中飼養(yǎng)。分別在實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)八周時(shí)用散瞳檢影驗(yàn)光法測(cè)量6組動(dòng)物的屈光度,用A超測(cè)量眼軸長(zhǎng)度。用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件分析各組之間屈光度和眼軸長(zhǎng)度差異。實(shí)驗(yàn)八周后,用過(guò)量麻醉法處死動(dòng)物,摘除眼球,去除赤道前的組織及玻璃體,分離視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜和鞏膜組織,分別提取視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜和鞏膜組織中的RNA,用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜和鞏膜組織中M1受體
3、mRNA的表達(dá),分析6組之間M1受體mRNA表達(dá)最的差異。用過(guò)量麻醉法處死動(dòng)物的同時(shí),將眼球放入快速固定液(10%甲醛+75%酒精+丙乙酸)中固定,通過(guò)免疫組化法觀察M1受體在視網(wǎng)膜各層細(xì)胞中的表達(dá)。 結(jié)果:實(shí)驗(yàn)前,Ⅰ組屈光度為+3.09±0.75D,眼軸長(zhǎng)度為7.58±0.31mm,Ⅱ組屈光度為+2.93±1.02D,眼軸長(zhǎng)度為7.54±0.43mm,Ⅲ組屈光度為+2.86±0.22D,眼軸長(zhǎng)度為7.51±0.22mm,Ⅳ組屈
4、光度為+3.17±0.98D,眼軸長(zhǎng)度為7.61±0.55mm,Ⅴ組屈光度為+3.05±0.54D,眼軸長(zhǎng)度為7.66±0.16mm,Ⅵ組屈光度為+2.89±0.96D,眼軸長(zhǎng)度為7.53±0.34mm,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,6組間屈光度和眼軸長(zhǎng)度無(wú)顯著性差異(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)八周后,Ⅰ組屈光度為-8.75±1.13D,眼軸長(zhǎng)度為8.96±0.18mm,Ⅱ組屈光度為-6.56±0.98D,眼軸長(zhǎng)度為8.61±0.27mm,Ⅲ組屈光度為-3.8
5、8±0.87D,眼軸長(zhǎng)度為8.32±0.78mm,Ⅳ組屈光度為-4.84±0.76D,眼軸長(zhǎng)度為8.42±0.49mm,Ⅴ組屈光度為+0.75±0.59D,眼軸長(zhǎng)度為8.10±0.35mm,Ⅵ組屈光度為+1.69±0.70D,眼軸長(zhǎng)度為8.00±0.53mm,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,Ⅰ.Ⅱ.Ⅲ.Ⅳ組與Ⅴ組間屈光度和眼軸長(zhǎng)度有顯著性差異(P<0.05),Ⅰ.Ⅱ.Ⅲ組間屈光度和眼軸長(zhǎng)度有顯著性差異(P<0.05),Ⅴ.Ⅵ組間屈光度和眼軸長(zhǎng)度有顯著性差異
6、(P<0.05)。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)結(jié)果顯示6組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的鞏膜組織、視網(wǎng)膜組織均有乙酰膽堿M1受體mRNA的表達(dá),脈絡(luò)膜組織沒(méi)有M1受體mRNA的表達(dá)。凝膠圖像分析結(jié)果顯示,Ⅰ組鞏膜組織的M1受體mRNA的相對(duì)含量為30.12±2.16,Ⅱ組為38.75±3.47,Ⅲ組為58.40±2.73,Ⅳ組為57.19±3.32,Ⅴ組為70.59±1.89,Ⅵ組為72.60±2.81,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,Ⅰ.Ⅱ.Ⅲ.Ⅳ組與Ⅴ組間有顯著差異(P<0.01)
7、,Ⅰ.Ⅱ.Ⅲ組間有顯著差異(P<0.01),Ⅴ.Ⅵ組間有顯著差異(P<0.01);Ⅰ組視網(wǎng)膜組織的M1受體mRNA的相對(duì)含量為31.82±2.39,Ⅱ組為35.54±2.97,Ⅲ組為56.38±3.34,Ⅳ組為55.67±2.53,Ⅴ組為70.16±2.45,Ⅵ組為73.34±2.83,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,Ⅰ.Ⅱ.Ⅲ.Ⅳ組與Ⅴ組間有顯著差異(P<0.01),Ⅰ.Ⅱ.Ⅲ組間有顯著差異(P<0.01),Ⅴ.Ⅵ組間有顯著差異(P<0.01)。
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