格爾德霉素對(duì)DAPK的調(diào)節(jié)在腦缺血再灌注中的保護(hù)作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：目前的研究結(jié)果表明，細(xì)胞內(nèi)死亡相關(guān)蛋白激酶(death associatedprotein kinase，DAPK)的調(diào)節(jié)主要體現(xiàn)在兩個(gè)層次：基因的表達(dá)和酶的活性調(diào)節(jié)。死亡信號(hào)引起的Smad蛋白和抑癌蛋白p53的激活可以增強(qiáng)DAPK基因的表達(dá)。DAPK的酶活性主要受磷酸化/去磷酸化的調(diào)節(jié)，但調(diào)節(jié)機(jī)制不止一種。DAPK的激活機(jī)制主要有Ca2+/鈣調(diào)素依賴的磷酸酶導(dǎo)致的308位的絲氨酸去磷酸化，胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)導(dǎo)致的735位

2、的絲氨酸磷酸化，以及酪氨酸蛋白激酶(Src)和磷酸酶(LAR)調(diào)節(jié)的491和492位酪氨酸的磷酸化等。在全腦和局灶腦缺血中發(fā)現(xiàn)，DAPK可以通過NMDA受體的過度激活，引起Ca2+內(nèi)流，激活鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)，使DAPK去磷酸化而激活[20]?？梢?，對(duì)于DAPK在不同生理?xiàng)l件下活性的調(diào)節(jié)是個(gè)復(fù)雜問題，需更進(jìn)一步的研究。為此，我們研究了在腦缺血/再灌注中格爾德霉素(GA)對(duì)DAPK的調(diào)節(jié)作用。
　　方法：采用四動(dòng)脈結(jié)扎法來構(gòu)建

3、SD大鼠全腦缺血模型，腦室注射法給藥，腦室注射格爾德霉素GA(800μM/lOul)，蛋白酶體抑制劑MG132(20μg/5μl)和DMSO(20％)。運(yùn)用Western Blot檢測(cè)DAPK在腦缺血再灌注中表達(dá)量和磷酸化水平變化，用免疫沉淀IP檢測(cè)腦室注射GA和MG132后DAPK和HSP90、caspase-8結(jié)合的表達(dá)和活性的變化情況。用焦油紫染色的方法檢測(cè)腦缺血再灌注中的大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的存活和凋亡。
　　結(jié)果：GA

4、引起腦缺血再灌注6小時(shí)DAPK表達(dá)量的降低，引起缺血復(fù)灌6小時(shí)DAPK磷酸化水平的升高。GA能夠引起腦缺血再灌注中DAPK-HSP90結(jié)合水平的降低，蛋白酶體抑制劑MG132抑制了GA引起的DAPK表達(dá)水平的下降。我們實(shí)驗(yàn)得出GA能夠引起DAPK-Fas結(jié)合的降低，GA能夠引起caspase-8的表達(dá)降低，而MG132抑制了這種作用。
　　結(jié)論：GA降低了腦缺血再灌注海馬CA1區(qū)DAPK的表達(dá)水平；GA通過抑制DAPK與HSP90