MacroH2A對B16黑色素瘤細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期進(jìn)程影響的研究.pdf

1、目的:
　　探索MacroH2A對體外培養(yǎng)B16黑色素瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期及凋亡的影響，以及其對黑色素瘤細(xì)胞cyclinD1、cyclinD3、CDK4、CDK6、CDK8表達(dá)的調(diào)控作用。探討MacroH2A對黑色素瘤進(jìn)展及對細(xì)胞周期影響的分子機制，更進(jìn)一步了解惡性黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展機制，并為惡性黑色素瘤的靶向治療提供新的可能性方法。
　　方法:
　　構(gòu)建MacroH2A干擾表達(dá)載體質(zhì)粒MacroH2A-shRNA質(zhì)粒和超

2、表達(dá)載體質(zhì)粒MacroH2A-pcDNA3.1(+)質(zhì)粒，將黑色素瘤細(xì)胞隨機分為五組即空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組，超表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組，干擾表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組，超表達(dá)后救援組，干擾表達(dá)后救援組。不同分組黑色素瘤細(xì)胞進(jìn)行相應(yīng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后，采用Realtime-PCR，western blot和免疫熒光等檢驗方法分別于mRNA和蛋白質(zhì)水平分析MacroH2A表達(dá)量以確定各組細(xì)胞成功轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染效率。用流式細(xì)胞術(shù)檢測黑色素瘤細(xì)胞凋亡及細(xì)胞所處不同細(xì)胞周期，并采用Re

3、altime-PCR、western blot檢測細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的關(guān)鍵因素cyclinD1、cyclinD3、CDK4、CDK6、CDK8相應(yīng)mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　干擾表達(dá)載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后黑色素瘤細(xì)胞MacroH2A在mRNA和蛋白質(zhì)水平均降低，超表達(dá)載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后MacroH2A在mRNA和蛋白質(zhì)水平均升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。MacroH2A高表達(dá)組細(xì)胞凋亡指數(shù)，G2/M期阻滯率較對照組明顯升高，低表達(dá)組凋亡

4、指數(shù)和G2/M期阻滯率較對照組均降低。MacroH2A高表達(dá)組和對照組相比cyclinD1、cyclinD3表達(dá)量明顯降低，CDK6、CDK8表達(dá)量降低，差異有顯著意義。
　　結(jié)論:
　　異型組蛋白MacroH2A的表達(dá)量升高能誘導(dǎo)B16黑色素瘤細(xì)胞凋亡，將細(xì)胞周期阻滯于G2/M期，作為染色質(zhì)的重要組成部分MacroH2A表達(dá)量的升高可抑制某些細(xì)胞周期關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子cyclinD1、cyclinD3和CDK6、CDK8等基因的