低強(qiáng)度脈沖超聲促進(jìn)周?chē)窠?jīng)損傷后再生的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　探索低強(qiáng)度脈沖超聲(low-intensity pulsed ultrasound，LIPUS)照射是否促進(jìn)雪旺細(xì)胞(Schwann cells，SCs)及大鼠坐骨神經(jīng)缺損自體神經(jīng)翻轉(zhuǎn)移植術(shù)后軸突的生長(zhǎng)，尋求最佳超聲照射劑量，同時(shí)初步探索其作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.采用250mW/cm2，500mW/cm2和750mW/cm2三個(gè)強(qiáng)度的LIPUS照射體外培養(yǎng)的SCs，每天一次，每次5分鐘，在照射的第1

2、、2、3、5、7天，分別用S100免疫熒光染色法及CCK8法檢測(cè)LIPUS照射后SCs的生長(zhǎng)及增殖情況;RT-PCR技術(shù)檢測(cè)S100、GFAP、CNTF、BDNF的表達(dá)水平。
　　2.建立SD大鼠坐骨神經(jīng)10mm缺損自體神經(jīng)翻轉(zhuǎn)移植模型，術(shù)后分別應(yīng)用上述三個(gè)強(qiáng)度LIPUS經(jīng)皮照射移植處的坐骨神經(jīng)，隔天一次，每次5分鐘，持續(xù)照射2～12周，通過(guò)坐骨神經(jīng)功能恢復(fù)評(píng)價(jià)、超聲造影肌肉灌注評(píng)價(jià)、電生理評(píng)價(jià)、NF200免疫熒光法染色、再生有髓

3、鞘神經(jīng)半薄切片后甲苯胺藍(lán)染色、再生有髓鞘神經(jīng)超薄切片后透射電鏡觀察、大鼠腓腸肌肌肉濕重恢復(fù)率、大鼠腓腸肌橫截面Masson染色及肌纖維橫截面積比較、Western blot法檢測(cè)腓腸肌NF-κB p65表達(dá)等方法評(píng)價(jià)超聲對(duì)移植神經(jīng)生長(zhǎng)的作用。
　　3.超聲引導(dǎo)下將溫度探針?lè)湃隨D大鼠坐骨神經(jīng)周?chē)O(jiān)測(cè)250mW/cm2，500mW/cm2和750mW/cm2三個(gè)不同強(qiáng)度LIPUS經(jīng)皮照射坐骨神經(jīng)5分鐘的過(guò)程中溫度變化情況。

4、　　結(jié)果：
　　1.普通光鏡和S100免疫熒光染色結(jié)果均顯示:接受照射第2天，實(shí)驗(yàn)組的SCs數(shù)量均多于對(duì)照組，低劑量組最多。CCK8檢測(cè)結(jié)果如下:照射第1天，各組SCs增殖無(wú)明顯差異(P＞0.05);照射第3、5、7天，低劑量組和中劑量組細(xì)胞增殖均明顯高于高劑量組和對(duì)照組(P＜0.01)。
　　2.照射第3天和第7天，實(shí)驗(yàn)組S100、CNTF、BDNF的表達(dá)均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，以低劑量組最高，實(shí)驗(yàn)組GFAP的表

5、達(dá)顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)，以低劑量組最低。
　　3.第2周起低劑量組坐骨神經(jīng)功能恢復(fù)明顯優(yōu)于其他組(P＜0.05)。第4周起低劑量組的PI和AUC明顯高于其他組(P＜0.05)。第12周時(shí)低劑量組和中劑量組的動(dòng)作電位波幅峰值和電生理曲線下面積的恢復(fù)指數(shù)均顯著高于其他兩組，以低劑量組最高(P＜0.05)。第12周時(shí)低劑量組再生有髓神經(jīng)纖維的密度、厚度及軸突直徑均最大(P＜0.05)。第8周時(shí)低劑量組軸突生長(zhǎng)最快。低劑量組的腓

6、腸肌肌肉濕重恢復(fù)率和肌纖維橫截面積均大于其他組(P＜0.05)。從第4周起低劑量紐腓腸肌NF-κB p65表達(dá)均低于其他各組。各組PI和AUC與動(dòng)作電位波幅峰值和電生理曲線下面積的恢復(fù)指數(shù)呈高度線性正相關(guān)(r均＞0.70)，與腓腸肌NF-κB p65表達(dá)呈高度線性負(fù)相關(guān)(r絕對(duì)值均＞0.70)。
　　4.三個(gè)劑量實(shí)驗(yàn)組在照射起點(diǎn)時(shí)、終點(diǎn)時(shí)的即刻溫度及治療過(guò)程中最高溫度均無(wú)明顯改變(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　三個(gè)