內(nèi)源性BDNF促周?chē)窠?jīng)損傷后再生及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的在小鼠坐骨神經(jīng)損傷后給予BDNF抗體中和內(nèi)源性BDNF,然后觀察再生情況以此反證內(nèi)源性BDNF對(duì)再生的影響.方法39只小鼠在右側(cè)坐骨神經(jīng)壓榨損傷后隨機(jī)分成三組(每組13只).實(shí)驗(yàn)組:腹腔注射BDNF抗體;實(shí)驗(yàn)對(duì)照組1(NGS組):腹腔注射等量正常山羊血清;實(shí)驗(yàn)對(duì)照組2(NS組):腹腔注射等量生理鹽水,每周二次,每組5只動(dòng)物坐骨神經(jīng)損傷7天時(shí)進(jìn)行擠壓試驗(yàn)(Pinch test),其余每組8只動(dòng)物存活14天,處死前4天在小鼠右側(cè)后肢后群

2、肌與足底皮下分別注射熒光示蹤劑快蘭(Fast Blue).動(dòng)物灌注固定后,取坐骨神經(jīng)壓榨損傷點(diǎn)遠(yuǎn)側(cè)端5mm長(zhǎng)神經(jīng)作半薄及超薄切片觀察;取與坐骨神經(jīng)相連的脊髓與背根節(jié),作冰凍切片在熒光顯微鏡下觀察熒光標(biāo)記細(xì)胞.目的探討小鼠坐骨神經(jīng)損傷后內(nèi)源性BDNF是否參與了脊髓前角運(yùn)動(dòng)細(xì)胞內(nèi)GAP-43、突觸素Ⅰ和突觸囊泡素表達(dá)的調(diào)節(jié).方法小鼠坐骨神經(jīng)壓榨損傷后,腹腔注射BDNF抗體,(腹腔注射N(xiāo)S做為對(duì)照),動(dòng)物存活1-2周.用RT-PCR和組織原位

3、雜交技術(shù)觀察GAP-43與突觸素Ⅰ mRNA在脊髓腰骶膨大部前角的表達(dá),用Western blot與免疫組織化學(xué)方法觀察GAP-43與突觸囊泡素(SYN)蛋白在脊髓腰骶膨大部前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元內(nèi)的表達(dá).目的探討B(tài)DNF對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠脊髓前角神經(jīng)元內(nèi)突觸素Ⅰ與突觸囊泡素(SYN)表達(dá)的影響.方法取孕14d大鼠子宮內(nèi)胎鼠的脊髓腹側(cè)部分神經(jīng)元,體外有血清培養(yǎng).在培養(yǎng)7d后,隨機(jī)分成對(duì)照組、BDNF組和抗BDNF組. BDNF組培養(yǎng)液中加入BDN