皮膚惡性黑色素瘤中uPA、MMP-9基因甲基化的相關(guān)研究.pdf

1、目的： (1)研究皮膚惡性黑素瘤中尿激酶型纖溶酶原激活劑(uPA)基因及基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)與其mRNA表達(dá)的關(guān)系。 (2)探討uPA、MMP-9基因甲基化在皮膚惡性黑素瘤發(fā)生和發(fā)展中的作用。 方法： (1)體外培養(yǎng)人表皮惡性黑素瘤A375細(xì)胞系，采用MTT法觀察S-腺苷甲硫氨酸(SAM)對A375細(xì)胞增殖的影響。 (2)按不接受和接受不同濃度SAM(100，25

2、0，400μmol/L)干預(yù)2天，3天，5天，分別將A375細(xì)胞系設(shè)立為對照組和處理組。采用半定量PCR(RT-PCR)法比較對照組和處理組A375細(xì)胞系uPA、MMP-9mRNA轉(zhuǎn)錄水平的差異。 (3)采用甲基化特異性多聚酶鏈反應(yīng)法(MS-PCR)比較兩組A375細(xì)胞系uPA、MMP-9基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)的變化。 結(jié)果： (1)MTT結(jié)果顯示SAM對A375細(xì)胞增殖有抑制作用。 (2)uPA、MMP

3、-9 mRNA在對照組A375細(xì)胞中均顯著表達(dá)，且基因啟動子區(qū)分別呈完全去甲基化或部分去甲基化狀態(tài)。 (3)經(jīng)SAM干預(yù)后uPA、MMP-9 mRNA表達(dá)不同程度降低，并且SAM對基因轉(zhuǎn)錄的抑制作用呈劑量和時(shí)間依賴性；同時(shí)uPA、MMP-9基因啟動子區(qū)去甲基化程度逐漸降低，發(fā)生不同程度高甲基化。 結(jié)論： SAM干預(yù)后顯著降低皮膚惡性黑素瘤A375細(xì)胞中uPA、MMP-9mRNA表達(dá)，這種表達(dá)的降低可能與uPA、M