豬源趨化因子CXCL17的基因克隆與刺激表達(dá)研究.pdf

1、CXC趨化因子家族配基17(CXC Ligand17,CXCL17)是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的趨化因子，僅有10年歷史，目前主要關(guān)于人源和鼠源CXCL17的研究，豬源CXCL17相關(guān)研究尚未見(jiàn)報(bào)道。已有人源和鼠源CXCL17研究報(bào)道，它是一個(gè)多功能蛋白質(zhì)，具有潛在的殺菌活性，抗炎活性，促進(jìn)血管生成及抗凋亡活性。這些活性研究主要集中于單核-巨噬細(xì)胞及各種腫瘤細(xì)胞等，未涉及到腸道細(xì)胞。腸道的健康水平很大程度的影響了豬的養(yǎng)殖，豬源 CXCL17基因的克隆

2、及其在豬腸道中的表達(dá)研究，不僅為人們對(duì)CXCL17帶來(lái)更全面的認(rèn)識(shí)，也將會(huì)為一些豬腸道疾病的研究帶來(lái)更新的了解，甚至給出更好的治療解決方案。
　　本研究以人CXCL17基因核苷酸序列為模板，從豬的EST庫(kù)中篩選出一系列相似序列，利用軟件拼接后，預(yù)測(cè)到豬CXCL17基因序列，以豬肺組織總RNA經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增后的cDNA為模板再次擴(kuò)增，得到了豬 CXCL17基因序列。對(duì)所得豬 CXCL17核苷酸序列及氨基酸序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析，

3、預(yù)測(cè)豬CXCL17是一個(gè)親水性小分子堿蛋白。另外，通過(guò)信號(hào)肽分析，預(yù)測(cè)其也是一個(gè)分泌性蛋白。此外，同源性及進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果顯示它與人CXCL17具有較高的相似度及親緣性，因此，豬CXCL17在功能上應(yīng)與人CXCL17極為接近。同時(shí)做組織分布研究，確定了豬CXCL17的結(jié)構(gòu)特性和分布特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)它在肺，胃部以及小腸中的分泌居多。接著構(gòu)建了豬CXCL17的原核表達(dá)載體pET28a-susCXCL17，以及真核表達(dá)載體pcDNA-susCXCL1

4、7，用于后續(xù)對(duì)豬CXCL17蛋白結(jié)構(gòu)和活性更深入的探索。
　　另外本研究，對(duì)豬 CXCL17在腸道細(xì)胞中的表達(dá)做了研究。用多種細(xì)菌感染IPEC-J2細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)IPEC-J2細(xì)胞受大腸桿菌等革蘭氏陰性菌刺激時(shí)CXCL17的表達(dá)水平增高顯著，初步證實(shí)腸道受到革蘭氏陰性菌的感染時(shí)高表達(dá)CXCL17，進(jìn)而發(fā)揮著抗菌作用，此外推測(cè)革蘭氏陰性菌區(qū)別于革蘭氏陽(yáng)性菌的特有成分——脂多糖對(duì)于CXCL17的誘導(dǎo)發(fā)揮著主要作用。接著提取了大腸桿菌的脂多