IPEX綜合征及XLP-1臨床與分子特點(diǎn)分析.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行了詳細(xì)闡述。
　　第一部分:IPEX新發(fā)突變一例分子與臨床特征研究.
　　目的:探討1例X連鎖多內(nèi)分泌腺病、腸病伴免疫失調(diào)綜合征患兒FOXP3基因變異、蛋白表達(dá)水平、免疫表型及臨床特征。
　　方法:對我院收治的1例表現(xiàn)為早發(fā)性頑固性腹瀉、自身免疫現(xiàn)象、內(nèi)分泌功能異常、生長發(fā)育落后、IgE增高的疑似IPEX男性患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞采用流式細(xì)胞儀檢測CD4+CD25+FOXP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例和FOX

2、P3蛋白表達(dá)，PCR法進(jìn)行外周血FOXP3基因擴(kuò)增及測序、比對分析，并與100例正常兒童FOXP3基因序列比較除外多態(tài)性以確定致病突變。
　　結(jié)果:該患兒CD4+CD25+FOXP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例較正常對照明顯減低，F(xiàn)OXP3蛋白表達(dá)量與正常對照無顯著差異。經(jīng)基因分析確診為IPEX，其FOXP3基因第8號外顯子末位堿基錯(cuò)義突變(G＞A)，導(dǎo)致FOXP3蛋白323位氨基酸由谷氨酸替換為賴氨酸(Glu323Lys)，突變基因的轉(zhuǎn)錄

3、產(chǎn)物中除了一部分為錯(cuò)義突變外，還形成了多種異常拼接體，部分為缺失第8號外顯子，部分同時(shí)缺失7、8號外顯子，另有部分完全或部分缺失5號外顯子及部分11號外顯子?；純耗赣H為該突變的攜帶者。100例正常兒童FOXP3基因相同位點(diǎn)未見變異。
　　結(jié)論:通過臨床、免疫學(xué)篩查、基因分析及流式細(xì)胞術(shù)，確診一例發(fā)生FOXP3多種不同異常拼接及錯(cuò)義突變的IPEX患兒，為此前未報(bào)到的新發(fā)突變，對早發(fā)頑固性腹瀉、濕疹、內(nèi)分泌功能異常伴自身免疫現(xiàn)象及不明

4、腎臟損害嬰幼兒，應(yīng)考慮IPEX可能并進(jìn)行Treg流式細(xì)胞術(shù)快速篩查及FOXP3基因分析以最終確診。
　　第二部分:XLP-1型患者臨床、基因和蛋白表達(dá)分析。
　　目的:探討SH2D1A基因突變所致XLP-1型患兒的臨床及分子特征，為臨床甄別和診斷此病提供信息。
　　方法:對15例臨床疑診為XLP-1型的男性患兒，收集歸納臨床資料和相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果，采取患兒及其親屬新鮮外周血進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測PBMC內(nèi)SAP蛋白的表達(dá)

5、，提取外周血DNA和RNA，PCR法擴(kuò)增SH2D1A基因cDNA序列直接進(jìn)行測序。在NCBI基因庫比對目的序列，發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)后擴(kuò)增相應(yīng)外顯子及或進(jìn)行TA克隆進(jìn)一步分析確定突變類型，同時(shí)對相關(guān)親屬進(jìn)行基因分析。
　　結(jié)果:通過對15例疑診XLP-1型患兒的基因和蛋白檢測，發(fā)現(xiàn)3例來自無血緣關(guān)系的不同家族的患兒存在SH2D1A基因突變，除外12例。3例突變均除外了基因多態(tài)性可能，其中2例為新發(fā)突變?；純?的母親、外祖母及患兒2的母親為