Egb761對腦慢性低灌注老齡大鼠海馬α、β-分泌酶影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景：癡呆是嚴(yán)重危害老年人健康的一種獲得性進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙綜合癥，其中，Alzheimer．病(Alzheimer’s Disease，AD)一直占據(jù)癡呆發(fā)病率的首位，是老年人的常見病之一。但是，散發(fā)性AD(sporadic Alzheimer disease，SAD)至今病因不明。近年來，大量研究表明，腦缺血，尤其是老年人普遍存在的腦慢性低灌注與散發(fā)性AD強(qiáng)烈相關(guān)，可以導(dǎo)致AD發(fā)病過程中的核心物質(zhì)B一淀粉樣蛋白(B-amyloi

2、d protein，A β)增加，但是具體機(jī)制仍不清楚。α-分泌酶(TACE)、β-分泌酶(BACEl)分別是淀粉樣蛋白前體蛋白(amyloid precursor protein，APP)進(jìn)行淀粉樣和非淀粉樣代謝的關(guān)鍵酶，也是調(diào)節(jié)A β生成量的關(guān)鍵物質(zhì)，因此在腦慢性低灌注條件下對TACE，BACEl進(jìn)行研究對于明確A β增加的機(jī)制以及進(jìn)一步探討AD的病因都有重要的意義。標(biāo)準(zhǔn)化銀杏葉制劑(GinkgoBiloba extract，Egb

3、761)目前常用于AD的治療，其具有的多種藥理作用均被認(rèn)為有益于改善AD癥狀，延緩病程，但是否能影響A β尚不明確。 目的：1．探討腦慢性低灌注對老齡大鼠海馬α、β-分泌酶mRNA表達(dá)及酶活性的影響；2．通過研究Egb761(商品名：金納多)對腦慢性低灌注老齡鼠a、B一分泌酶及學(xué)習(xí)記憶功能的影響探討其是否可以通過影響α、β-分泌酶調(diào)節(jié)A β的生成量從而改善AD的癥狀。 方法：老齡Wistar；趕鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、低

4、灌注組和Egb761治療組，各組再進(jìn)一步分為1周、2周、4周和16周亞組。低灌注組和Egb761組行雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久結(jié)扎(two vesselesocclusion，2VO)術(shù)，假手術(shù)組僅分離血管不結(jié)扎，Egb761組術(shù)后即以金納多100m/(kg*d)灌胃，7天亞組療程1周，其他亞組療程2周。各亞組在術(shù)前及處死前分別進(jìn)行Y-迷宮試驗(yàn)，檢測大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。在各時(shí)間點(diǎn)處死后，迅速斷頭取腦，分離雙側(cè)海馬，提取蛋白或RNA后，-80℃保存?zhèn)?/p>

5、用。應(yīng)用Real-time PCR和熒光法(底物特異性熒光探針)分別檢測α、β-分泌酶mRNA和酶活性的變化。 結(jié)果：1．腦慢性低灌注對老齡大鼠海馬α、β-分泌酶mRNA表達(dá)的影響及金納多對其的影響：低灌注組TACE mRNA在2VO術(shù)后1周時(shí)與對照組無顯著性差異(p>0.05)，2、4、16周時(shí)明顯低于對照組(p<0.01)。金納多在用藥期間顯著升高TACE mRNA的表達(dá)，停藥后，在第4周，其TACE mRNA表達(dá)仍顯著高

6、于低灌注組(p<0.01)。腦慢性低灌注導(dǎo)致海馬BACEI mRNA的表達(dá)在術(shù)后1周時(shí)即有所降低(p<0.05 vs假手術(shù)組)，2周時(shí)降低更明顯(p<0.01 vs假手術(shù)組)，4周和16周時(shí)恢復(fù)到與假手術(shù)組無顯著性差異(p>0.05)；金納多在各時(shí)間點(diǎn)對BACEl mRNA的表達(dá)均無影響(p>0.05)。2．腦慢性低灌注對老齡大鼠海馬α、β-分泌酶活性的影響及金納多對其的影響：與假手術(shù)組相比低灌注組2VO術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)TACE活性均顯著降

7、低(P<0.01)，BACEl活性均顯著上調(diào)(p<0.01或p<0.05)。金納多在用藥期間可以顯著升高TACE的活性并降低BACEI活性(p<0.01或p<0.05)。3．腦慢性低灌注對老齡大鼠學(xué)習(xí)記憶能力影響及金納多對其的影響：2VO模型鼠在2周時(shí)即出現(xiàn)明顯的認(rèn)知功能下降(p<0.05 vs假手術(shù)組)4周和16周時(shí)認(rèn)知功能的損害更為明顯(p<0.01vs假手術(shù)組)，未出現(xiàn)恢復(fù)的趨勢。Egb761組在術(shù)后4周和16周學(xué)習(xí)記憶能力較低灌