骨靶向抗骨質(zhì)疏松藥物——依替二膦酸鍶的合成及藥效研究.pdf

1、目的： (1)改進(jìn)鍶鹽母體設(shè)計(jì)，尋找并合成一種具有毒副作用小、一定的溶解度、能夠有效地改善鍶的生物利用度同時(shí)具有骨靶向性抗骨質(zhì)疏松效應(yīng)的化合物。 (2)檢測(cè)該化合物體外對(duì)成骨樣細(xì)胞株的毒性和對(duì)其骨形成生理功能的影響。 (3)進(jìn)一步檢測(cè)該化合物對(duì)絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型的治療作用。 方法： (1)改進(jìn)鍶鹽的母體：以依替二膦酸根作為鍶鹽的母體，將鍶與依替二膦酸兩者拼合起來(lái)合成新化合依替二膦酸鍶——一種

2、新的鍶鹽。 (2)進(jìn)行體外羥磷灰石吸附實(shí)驗(yàn)，以檢測(cè)依替二膦酸鍶的體外骨靶向性。 (3)通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、臺(tái)盼藍(lán)排斥實(shí)驗(yàn)和MTT比色，檢測(cè)10<'-5>M～10<'-3>M濃度的依替二膦酸二鈉、二氯化鍶和依替二膦酸鍶對(duì)ROS17/2.8成骨樣細(xì)胞的毒性。 (4)通過堿性磷酸酶和I型膠原，檢測(cè)10<'-5>M～10<'-3>M濃度的依替二膦酸二鈉、二氯化鍶和依替二膦酸鍶對(duì)ROS17/2．8成骨樣細(xì)胞成骨活性的影響。

3、 (5)通過對(duì)不同時(shí)點(diǎn)絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松大鼠血清中BGP和TRAP-5b的測(cè)定，檢測(cè)依替二膦酸二鈉(80mg/Kg．day)、二氯化鍶(60mg/Kg．day)和依替二膦酸鍶(50mg/Kg．day，100mg/Kg．day和150mg/Kg．day)對(duì)絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松大鼠骨代謝的影響。 (6)通過對(duì)不同時(shí)點(diǎn)絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松大鼠股骨及第二腰椎BMD的測(cè)定，檢測(cè)依替二膦酸二鈉(80mg/Kg.day)、二氯化鍶(60mg/k

4、g.day)和依替二膦酸鍶(50mg/Kg.day,100mg/Kg.day和150mg/Kg.day)對(duì)絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松大鼠股骨和椎骨BMD的影響。 (7)通過對(duì)不同時(shí)點(diǎn)絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松大鼠股骨及第二腰椎生物力學(xué)特性的測(cè)定，檢測(cè)依替二膦酸二鈉(80mg/Kg.day)、二氯化鍶(60mg/Kg.day)和依替二膦酸鍶(50mg/Kg.day,100mg/Kg.day和150mg/Kg.day)對(duì)絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松大鼠股骨和椎骨生

5、物力學(xué)性質(zhì)的影響。 (8)通過對(duì)不同時(shí)點(diǎn)絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松大鼠股骨及第一腰椎組織形態(tài)學(xué)的觀察，檢察依替二膦酸二鈉(80mg/Kg.day)、二氯化鍶(60mg/kg.day)和依替二膦酸鍶(50mg/Kg.day,100mg/Kg.day和150mg/Kg.day)對(duì)絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松大鼠股骨和椎骨組織形態(tài)學(xué)的影響。 結(jié)論： (1)運(yùn)用冰乙酸與三氯化磷通過化學(xué)縮合等步驟，可于實(shí)驗(yàn)室得到較高純度的依替膦酸鍶。

6、(2)氯化鍶溶液中的鍶離子對(duì)羥基磷灰石無(wú)親和性；依替二膦酸根能夠顯著提高鍶原子對(duì)羥基磷灰石的親和性。 (3)本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)新化合物依替二膦酸鍶在10<'-5>～10<'-3>M濃度對(duì)ROS17/2.8成骨樣細(xì)胞的無(wú)明顯毒性作用。依替二膦酸鍶對(duì)ROS17/2.8成骨樣細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖的促進(jìn)作用。 (4)二氯化鍶(60mg/Kg．day)和依替二膦酸鍶(100mg/Kg．day)能增強(qiáng)體外培養(yǎng)ROS17/2.8成骨樣細(xì)胞的堿性磷

7、酸酶活性和細(xì)胞內(nèi)Ⅰ型膠原的表達(dá)。 (5)依替二膦酸鍶對(duì)去勢(shì)后大鼠成骨細(xì)胞分泌BGP水平無(wú)抑制作用。依替二膦酸鍶50 mg/Kg．day、100mg/Kg．day和150mg/Kg．day治療劑量均能有效抑制破骨細(xì)胞分泌TRAP-5b的能力。 (6)50mg/Kg．d、100mg/Kg．d和150mg/Kg．d三種不同劑量的依替二膦酸鍶均能有效地增加去勢(shì)大鼠椎體和股骨的BMD，其中以150mg/Kg．d干預(yù)組為明顯。

8、 (7)依替二膦酸鍶(100mg/Kg．day)干預(yù)8周后即可增強(qiáng)股骨的抗彎曲強(qiáng)度。依替二膦酸鍶干預(yù)4周后，可起到防止去勢(shì)所致的大鼠腰椎抗壓縮強(qiáng)度迅速下降；依替二磷酸100mg/Kg和150 mg/Kg治療劑量治療12周后，能夠明顯改善大鼠腰椎的抗壓縮力學(xué)強(qiáng)度。 (8)50mg/Kg．day、100mG/Kg．day和150mg/Kg．day依替二膦酸鍶治療，能明顯明顯抑制絕經(jīng)期后大鼠骨吸收活動(dòng)，減少骨質(zhì)丟失。依替二膦酸鍶治療