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文檔簡(jiǎn)介
1、本研究分為二部分:
第一部分:建立高壓液相色譜方法檢測(cè)肝硬化大鼠腸道通透性(intestinal permeability,IP)
目的:鑒于腸道通透性在肝硬化細(xì)菌移位中重要作用,故建立通過(guò)雙糖吸收試驗(yàn)評(píng)價(jià)肝硬化大鼠腸道通透性的高效液相色譜法(high performance liquid chromatography,HPLC),以研究肝硬化細(xì)菌移位的發(fā)生機(jī)制。
方法:建立大鼠四氯化碳肝硬化模
2、型,成功制得肝硬化大鼠30只,另取正常大鼠30只作為對(duì)照。禁食8-12小時(shí),經(jīng)口灌服2ml乳果糖/甘露醇混合液(含乳果糖100mg,甘露醇50mg),收集8小時(shí)尿液,通過(guò)煮沸和添加離子交換樹(shù)脂去除蛋白和離子后送檢。色譜工作條件:色譜柱:NH2柱(4.6mm×250mm×5um,Warters);流動(dòng)相:乙腈∶水(70∶30V/V);流速:1.0ml/min;進(jìn)樣量:20ul;柱溫:室溫;檢測(cè)儀:示差折光檢測(cè)器2000(refractiv
3、e index detector2000,RI2000)。
結(jié)果:在上述色譜條件下,尿樣中甘露醇和乳果糖能得到良好分離,甘露醇和乳果糖的保留時(shí)間分別為6.721min和9.242min。甘露醇和乳果糖的線(xiàn)性范圍分別為5-1000ug/ml、2.5-500ug/ml。甘露醇的加樣回收率在92.7%-98%之間,乳果糖的加樣回收率在91.3%-97.4%之間。肝硬化大鼠腸道通透性(L/M:0.03578±0.01245)較正常
4、大鼠腸道通透性(L/M: 0.02563±0.00871)顯著增高(P<0. 05)。
結(jié)論:成功建立了檢測(cè)肝硬化大鼠腸道通透性的高效液相色譜方法,并證實(shí)肝硬化大鼠存在腸道通透性升高。
第二部分:穿心蓮對(duì)肝硬化大鼠腸道細(xì)菌腸道通透性、腸道細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)(intestinal bacterial overgrowth,IBO)和細(xì)菌移位(bacterial translocation,BT)的影響
5、目的:探討穿心蓮對(duì)肝硬化大鼠腸道通透性、腸道細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)和細(xì)菌移位的作用,為其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
方法:建立大鼠四氯化碳肝硬化模型。將制得30只肝硬化大鼠隨機(jī)分為4組:AN組(穿心蓮組,n=8,穿心蓮0.5g/kg*d)、NF組(諾氟沙星組,n=8,諾氟沙星0.3g/kg*d)、AN+NF組(穿心蓮+諾氟沙星組,n=8,穿心蓮0.5g/kg*d+諾氟沙星0.3g/kg*d)、CN組(對(duì)照組,n=6,生理鹽水4ml/kg*d
6、),給藥2周后結(jié)束。比較各組死亡率,取外周靜脈血檢測(cè)血漿TNF-a、NO水平,并獲取腸系膜淋巴結(jié)、血液、肝、脾和回腸內(nèi)容物做細(xì)菌培養(yǎng)。采用高壓液相色譜法檢測(cè)腸粘膜通透性,部分肝臟和回腸組織作病理切片。
結(jié)果:與CN組相比,AN組、NF組和AN+NF組的TNF-a、NO的濃度顯著降低(P<0.05),回腸細(xì)菌計(jì)數(shù)和細(xì)菌移位發(fā)生率顯著下降(P<0.05);AN組和NF組的腸道通透性顯著下降(P<0.05)。病理檢查發(fā)現(xiàn)CN組肝
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