雙歧桿菌對卵清蛋白致敏大鼠腸道通透性的保護作用.pdf

1、背景:食物過敏是兒童時期常見的過敏性疾病，嚴格避免接觸食物過敏原是預防食物過敏的最有效的治療手段，但其在現(xiàn)實生活中難以執(zhí)行。兒童時期持續(xù)的食物過敏可能導致成年期哮喘的發(fā)生，因此全世界都在積極探索一種簡單易行預防和治療食物過敏的方法。在國外有使用益生菌預防性治療食物過敏的成功報道，提示益生菌對食物過敏的預防治療有一定的可行性。因食物過敏的發(fā)生機制較為復雜，需一步步研究、完善。國內(nèi)外尚未見有雙歧桿菌能降低OVA致敏大鼠腸道通透性的報道。

2、 目的:本研究通過觀察雙歧桿菌對卵清蛋白(Ovalbumin，OVA)致敏大鼠的腸道黏膜通透性、腸黏膜組織形態(tài)學影響，從速發(fā)型過敏反應發(fā)生原理及腸道黏膜屏障功能的角度去探討雙歧桿菌對OVA致敏大鼠腸道黏膜的保護作用，為應用益生菌二級預防食物過敏提供動物實驗研究并探討其保護腸道黏膜屏障的機制。 對象:3周齡Sprague Oawley(SD)大鼠，隨機分為三組，分別為常對照組、陽性對照組、雙歧桿菌組。 方法:

3、1.大鼠常規(guī)無雞蛋飼料喂養(yǎng)，雙歧桿菌組每天用雙歧桿菌0.75g加入無菌稀釋液10ml中，按照1.5mg／g灌胃3周；陽性對照組和正常對照組直接用無菌稀釋液灌胃3周。 2.卵清蛋白腹腔注射建立食物致敏模型(正常對照組除外)，于灌胃3周后開始。第1天使用含10 ug OVA及1mg AL(OH)3的無菌生理鹽水(normal saline，NS)0.5ml腹腔注射進行基礎致敏，第15天使用含10 ug OVA的無菌NS 0.5ml腹

4、腔注射進行強致敏，強化致敏后第5日、9日、13日、15日以含OVA 500ug無菌NS 0.5ml灌胃對大鼠進行激發(fā)，共4次。正常對照組按照以上時間使用無菌NS假致敏及假強化。 3.留取24小時尿液檢測乳果糖與甘露醇的比值。最后一次激發(fā)前一天使用的乳果糖(lactulose，L)(500mg／只)、甘露醇(mannitol，M)(100mg／只)灌胃，留取灌胃后24小時尿液，用高效液相色譜儀(high presser liqui

5、d chromatography，HPLC)檢測各組大鼠尿液中L與M的濃度并計算其比值(L／M)。 4.最后一次激發(fā)1小時后處死大鼠，取大鼠小腸組織HE染色進行觀察腸黏膜，甲苯胺蘭染色行肥大細胞完整性評估，并采用透射電鏡觀察腸黏膜超微結構。 結果: 1.雙歧桿菌組24小時尿中乳果糖與甘露醇的比值(0.068±0.008)低于陽性對照組(0.131±0.012)(P<0.05)，但高于正常對照組(0.027±0.0

6、04)(P<0.05)。 2.光鏡HE染色下腸黏膜組織形態(tài)學改變以表皮損傷積分(epithelial damage scoring，EDS)評估，雙歧桿菌組腸道黏膜部分表皮細胞受損(P50=1.3)，陽性對照組大部分表皮細胞受損、脫落(P50=2.0)，正常對照組表皮細胞完整(P50=1.0)；電鏡下雙歧桿菌組腸道黏膜小腸絨毛完整，排列較整齊，局部線粒體腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)無明顯擴張，陽性對照組小腸絨毛出現(xiàn)稀疏、脫落，甚至溶解等炎癥改變

7、，細胞連接模糊，線粒體廣泛腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，粗而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒，正常對照組小腸絨毛完整，排列整齊，細胞連接完整，線粒體無水腫，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)無擴張。 雙歧桿菌組腸道黏膜形態(tài)破壞明顯輕于陽性對照組，但較正常對照組損傷重。 3.甲苯胺藍染色下可見雙歧桿菌組大鼠小腸黏膜固有層肥大細胞大部分未脫顆粒，少見聚集現(xiàn)象，陽性對照組大鼠小腸肥大細胞聚集，多數(shù)肥大細胞胞膜破裂，向外排顆粒，正常對照組大鼠小腸固有層肥大細胞胞膜完整，輪廓清晰，無脫顆粒，無聚集