寧夏無果枸杞芽提取物對小鼠胸腺淋巴細胞分化與Notch通路信號因子的作用.pdf

1、目的：通過檢測增齡過程中小鼠胸腺組織結構、Notch通路信號因子基因表達及淋巴細胞亞群的變化情況，分析小鼠年齡增長與胸腺各種變化之間的關系，從而探討免疫與衰老的關系，并為下一步觀察寧夏無果枸杞芽提取物對自然衰老小鼠胸腺 Notch通路信號因子與淋巴細胞分化的影響提供理論和實驗依據(jù)。
　　方法：選取2周齡、4周齡、6周齡、8周齡、16周齡、24周齡健康雄性 C57小鼠，分為6組，每組15只。利用胸腺指數(shù)、HE染色觀察增齡過程中小鼠胸

2、腺的變化；應用實時熒光定量 PCR法檢測增齡過程中小鼠胸腺細胞 NotchⅠ、PSⅠ、PSⅡ、HES-Ⅰ基因表達的變化；應用流式細胞術檢測增齡過程中小鼠胸腺淋巴細胞亞群分化的情況。
　　結果：1、隨著年齡增加，小鼠胸腺指數(shù)逐漸減小，24周齡小鼠胸腺指數(shù)最小，與其它各周齡組比較，有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；2、HE染色顯示，2、4、6周齡小鼠胸腺組織結構正常，各組間變化不大，8周齡胸腺皮質變薄，16周齡胸腺開始萎縮，24周齡胸腺萎

3、縮程度加深，表現(xiàn)為：皮質變薄，細胞稀疏、散亂分布，皮質與髓質交叉現(xiàn)象嚴重，皮髓質界線消失；3、熒光定量PCR結果顯示，小鼠胸腺細胞NotchⅠ、PSⅠ、PSⅡ、HES-Ⅰ基因 mRNA的表達均呈隨年齡增大表達量增加的趨勢，24周齡表達量減少，與前面幾組相比，具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；4、流式細胞結果顯示，隨年齡增長，小鼠胸腺內 CD4+CD8+細胞比例減少，CD4+細胞和CD8+細胞比例呈上升趨勢，24周齡降至最低，與前面幾組相比

4、，有統(tǒng)計學意義（P<0.05），2、4、6、8周齡胸腺 CD4+/CD8+比值逐漸增加，16周齡開始下降，24周齡降至最低，與前面幾組相比，有統(tǒng)計學意義（P<0.05），CD28分子的表達呈上升趨勢，24周齡開始下降，與前面幾組相比，有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。5、對 Notch信號因子基因表達和T細胞亞群比例進行相關性分析，發(fā)現(xiàn)24周齡前的階段 NotchⅠ、PSⅠ、PSⅡ、HES-Ⅰ與CD4+CD8+雙陽性細胞及CD4+單陽性細胞

5、無相關性，與CD8+呈正相關。
　　第二部分寧夏無果枸杞芽提取物（FLE）對小鼠Notch通路信號因子的表達及淋巴細胞亞群分化的影響
　　目的：本實驗通過觀察給予寧夏無果枸杞芽提取物前后各組小鼠胸腺指數(shù)、胸腺結構、小鼠胸腺淋巴細胞亞群及 Notch通路信號因子 NotchⅠ、PSⅠ、PSⅡ、HES-Ⅰ表達的變化，明確 FLE對小鼠胸腺結構、胸腺淋巴細胞亞群分化的影響及與 Notch通路的關系，探討 FLE影響免疫衰老的可能的

6、機制，為寧夏無果枸杞芽抗衰老研究提供實驗依據(jù)。
　　方法：將60只24周齡健康雄性 C57小鼠隨機分為4組：空白對照組、FLE低劑量組、FLE中劑量組和FLE高劑量組，每組15只。分別用質量/體積百分比為4％、8%、16%FLE灌胃，0.2 mL/（10 g·d）)，空白對照組等量生理鹽水灌胃，連續(xù)8周。灌胃結束后，處死小鼠并取材，HE染色觀察各組小鼠胸腺結構、應用實時熒光定量 PCR檢測各組小鼠胸腺細胞 NotchⅠ、PSⅠ、P

7、SⅡ、HES-Ⅰ基因的表達、應用流式細胞術檢測小鼠胸腺淋巴細胞亞群的分化情況。
　　結果：用寧夏無果枸杞芽提取物灌胃小鼠8周后，無果枸杞芽中、高劑量組可明顯改善胸腺萎縮和結構的退化；PCR法檢測顯示：無果枸杞芽灌胃組小鼠胸腺組織NotchⅠ、PSⅠ、PSⅡ、HES-Ⅰ基因的表達量降低；流式細胞術結果顯示：寧夏無果枸杞芽對 CD4+CD8+雙陽性細胞的改變不明顯，可明顯升高 CD4+單陽性細胞比例，同時降低CD8+單陽性細胞比例，升

8、高CD4+/CD8+比值，增加CD28分子的表達。
　　結論：本實驗結果顯示寧夏無果枸杞芽提取物可明顯改善小鼠胸腺萎縮狀況，能夠降低NotchⅠ、PSⅠ、PSⅡ、HES-Ⅰ基因的表達量，增加CD4+單陽性細胞分化的同時抑制 CD8+單陽性細胞分化，升高 CD4+/CD8+比值，提示寧夏無果枸杞芽可改善衰老所致胸腺萎縮，與無果枸杞芽提取物增加 CD4+單陽性細胞分化，抑制 CD8+單陽性細胞分化，升高 CD4+/CD8+比值，維持