TLR3mRNA在急性腦梗塞患者外周血中單個(gè)核細(xì)胞的表達(dá)及氯喹對(duì)其表達(dá)的影響.pdf

1、目的：1.觀察To11樣受體3(To11-like receptor3，TLR3)mRNA在急性腦梗塞(Acutecerebral infarct，ACI)患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(periphoral blood mononuclear cell，PBMC)中的表達(dá)及氯喹對(duì)其表達(dá)的影響。
　　2.探討急性腦梗塞后TLR3在機(jī)體中損傷的相關(guān)機(jī)制，為ACI的臨床治療提供新的思路。
　　方法：收集2011年3月～2012年1月期間在

2、徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院ACI患者100例(所有患者均在發(fā)病三天內(nèi))，隨機(jī)分為腦梗塞組和氯喹組，每組各50例，氯喹組為PBMC培養(yǎng)基中加入氯喹，并結(jié)合MTT試驗(yàn)結(jié)果及氯喹藥物濃度對(duì)細(xì)胞的毒性，將氯喹組分為不同濃度(0、12.5、25、50、100μmol/L)的亞組。同期收集徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院體檢中心符合入組標(biāo)準(zhǔn)體檢者50例設(shè)為對(duì)照組。每名入選者均禁食12 h以上，于次日清晨采肘正中靜脈血12 ml，以EDTA抗凝，采用密度梯度離

3、心法得到PBMC進(jìn)行培養(yǎng)。MTT檢測(cè)PBMC活性；RT-PCR檢測(cè)PBMC內(nèi)TLR3 mRNA及干擾素β(Interferon-β，IFN-β)mRNA表達(dá)情況；ELISA檢測(cè)PBMC培養(yǎng)液上清中IFN-β與白介素6(Interleukin-6，IL-6)的含量。
　　結(jié)果：1.MTT結(jié)果顯示：
　　(1)PBMC培養(yǎng)72h時(shí)OD值與培養(yǎng)24h、48h時(shí)OD值比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。24h時(shí)OD值與48h時(shí)OD值比

4、較，二者之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　(2)氯喹濃度200μmol/LOD值與濃度12.5、25、50、100μmol/LOD值相比，明顯降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。氯喹濃度12.5、25、50、100μmol/L之間比較無明顯變化，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2.RT-PCR結(jié)果顯示：
　　(1)腦梗塞組TLR3 mRNA、IFN-β mRNA與健康組TLR3和IFN-β mRNA相

5、比，表達(dá)量增高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　(2)氯喹濃度12.5μmol/L時(shí)TLR3、IFN-βmRNA與空白對(duì)照組TLR3、IFN-β mRNA相比，表達(dá)量降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　3.ELISA結(jié)果顯示：
　　(1)培養(yǎng)基血清中，腦梗塞組IFN-β、IL-6含量高于健康對(duì)照組(P<0.01)。
　　(2)氯喹濃度在20μmol/L時(shí)，培養(yǎng)基上清中IFN-β、IL-6與空白I

6、FN-β、IL-6相比，含量降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　4.IFN-B與TLR3 mRNA的表達(dá)變化趨勢(shì)呈線性正相關(guān)(r=0.756，P<0.01)。
　　結(jié)論：1.急性腦梗塞后TLR3的表達(dá)量上調(diào)，可能通過促使細(xì)胞因子的分泌參與了機(jī)體損傷。
　　2.氯喹對(duì)TLR3 mRNA的表達(dá)有抑制作用，氯喹濃度12.5～100μ mol/L時(shí)，能降低炎性因子的產(chǎn)生，起保護(hù)作用；當(dāng)氯喹濃度大于100μmol/L，