TLR3mRNA在急性腦梗塞患者外周血中單個核細胞的表達及氯喹對其表達的影響.pdf

1、目的：1.觀察To11樣受體3(To11-like receptor3，TLR3)mRNA在急性腦梗塞(Acutecerebral infarct，ACI)患者外周血單個核細胞(periphoral blood mononuclear cell，PBMC)中的表達及氯喹對其表達的影響。
　　2.探討急性腦梗塞后TLR3在機體中損傷的相關(guān)機制，為ACI的臨床治療提供新的思路。
　　方法：收集2011年3月～2012年1月期間在

2、徐州醫(yī)學院附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院ACI患者100例(所有患者均在發(fā)病三天內(nèi))，隨機分為腦梗塞組和氯喹組，每組各50例，氯喹組為PBMC培養(yǎng)基中加入氯喹，并結(jié)合MTT試驗結(jié)果及氯喹藥物濃度對細胞的毒性，將氯喹組分為不同濃度(0、12.5、25、50、100μmol/L)的亞組。同期收集徐州醫(yī)學院附屬醫(yī)院體檢中心符合入組標準體檢者50例設(shè)為對照組。每名入選者均禁食12 h以上，于次日清晨采肘正中靜脈血12 ml，以EDTA抗凝，采用密度梯度離

3、心法得到PBMC進行培養(yǎng)。MTT檢測PBMC活性；RT-PCR檢測PBMC內(nèi)TLR3 mRNA及干擾素β(Interferon-β，IFN-β)mRNA表達情況；ELISA檢測PBMC培養(yǎng)液上清中IFN-β與白介素6(Interleukin-6，IL-6)的含量。
　　結(jié)果：1.MTT結(jié)果顯示：
　　(1)PBMC培養(yǎng)72h時OD值與培養(yǎng)24h、48h時OD值比較有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。24h時OD值與48h時OD值比

4、較，二者之間無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　(2)氯喹濃度200μmol/LOD值與濃度12.5、25、50、100μmol/LOD值相比，明顯降低，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。氯喹濃度12.5、25、50、100μmol/L之間比較無明顯變化，差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　2.RT-PCR結(jié)果顯示：
　　(1)腦梗塞組TLR3 mRNA、IFN-β mRNA與健康組TLR3和IFN-β mRNA相

5、比，表達量增高，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　(2)氯喹濃度12.5μmol/L時TLR3、IFN-βmRNA與空白對照組TLR3、IFN-β mRNA相比，表達量降低，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　3.ELISA結(jié)果顯示：
　　(1)培養(yǎng)基血清中，腦梗塞組IFN-β、IL-6含量高于健康對照組(P<0.01)。
　　(2)氯喹濃度在20μmol/L時，培養(yǎng)基上清中IFN-β、IL-6與空白I

6、FN-β、IL-6相比，含量降低，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　4.IFN-B與TLR3 mRNA的表達變化趨勢呈線性正相關(guān)(r=0.756，P<0.01)。
　　結(jié)論：1.急性腦梗塞后TLR3的表達量上調(diào)，可能通過促使細胞因子的分泌參與了機體損傷。
　　2.氯喹對TLR3 mRNA的表達有抑制作用，氯喹濃度12.5～100μ mol/L時，能降低炎性因子的產(chǎn)生，起保護作用；當氯喹濃度大于100μmol/L，