惡性瘧原蟲基因clag9黏附功能研究.pdf

1、瘧疾是嚴(yán)重危害人類健康的疾病。腦型瘧疾(CM)是惡性瘧疾的癥狀之一，也是最主要的致死原因。CM的病理基礎(chǔ)是紅內(nèi)期晚期滋養(yǎng)體和裂殖體感染的紅細(xì)胞與宿主內(nèi)皮細(xì)胞之間的黏附。CM所涉及到的多因素和不同機(jī)制迄今尚未闡明。前期文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，Clag9蛋白是感染紅細(xì)胞與人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HBMVEC)發(fā)生黏附的關(guān)鍵蛋白。本實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)通過生物信息學(xué)軟件對Clag9進(jìn)行抗原性和表面可能性分析，選取了Clag9的三個片段Cg1，Cg2,和Cg3，利

2、用原核表達(dá)三種多肽片段的GST融合蛋白，檢測三種蛋白影響HBMVEC關(guān)鍵的黏附相關(guān)受體細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)表達(dá)的情況，以蛋白中檢測的對應(yīng)內(nèi)毒素劑量做為對照，結(jié)果表明，Cg3能夠上調(diào)宿主細(xì)胞受體ICAM-1的表達(dá)。但Cg1和Cg2沒有類似作用。由于內(nèi)毒素具有很強(qiáng)的誘導(dǎo)ICAM-1表達(dá)的作用，為了更加明確Clag三個片段對于血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附功能的影響，必須去除蛋白中的內(nèi)毒素。 本實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)策略是：通過構(gòu)建真核表達(dá)載體，

3、利用哺乳動物細(xì)胞表達(dá)上述三種Clag9片段或用去除原核表達(dá)蛋白中內(nèi)毒素的方法獲得內(nèi)毒素含量不影響血管內(nèi)皮細(xì)胞表面ICAM-1表達(dá)的Clag9片段；用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)做為檢測蛋白黏附功能的前期實(shí)驗(yàn)的靜態(tài)模型，在體外將蛋白與HUVEC共同孵育，用流式細(xì)胞儀檢測宿主細(xì)胞表面ICAM-1表達(dá)的情況。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：去除內(nèi)毒素后的Cg3與對照組同等劑量的GST對HUVEC的作用結(jié)果無顯著差異，表明Cg3無明顯上調(diào)宿主細(xì)胞受體IC