惡性瘧原蟲基因clag9黏附功能研究.pdf

1、瘧疾是嚴重危害人類健康的疾病。腦型瘧疾(CM)是惡性瘧疾的癥狀之一，也是最主要的致死原因。CM的病理基礎是紅內期晚期滋養(yǎng)體和裂殖體感染的紅細胞與宿主內皮細胞之間的黏附。CM所涉及到的多因素和不同機制迄今尚未闡明。前期文獻檢索發(fā)現，Clag9蛋白是感染紅細胞與人腦微血管內皮細胞(HBMVEC)發(fā)生黏附的關鍵蛋白。本實驗室前期實驗通過生物信息學軟件對Clag9進行抗原性和表面可能性分析，選取了Clag9的三個片段Cg1，Cg2,和Cg3，利

2、用原核表達三種多肽片段的GST融合蛋白，檢測三種蛋白影響HBMVEC關鍵的黏附相關受體細胞間黏附分子-1(ICAM-1)表達的情況，以蛋白中檢測的對應內毒素劑量做為對照，結果表明，Cg3能夠上調宿主細胞受體ICAM-1的表達。但Cg1和Cg2沒有類似作用。由于內毒素具有很強的誘導ICAM-1表達的作用，為了更加明確Clag三個片段對于血管內皮細胞黏附功能的影響，必須去除蛋白中的內毒素。 本實驗的實驗策略是：通過構建真核表達載體，

3、利用哺乳動物細胞表達上述三種Clag9片段或用去除原核表達蛋白中內毒素的方法獲得內毒素含量不影響血管內皮細胞表面ICAM-1表達的Clag9片段；用人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)做為檢測蛋白黏附功能的前期實驗的靜態(tài)模型，在體外將蛋白與HUVEC共同孵育，用流式細胞儀檢測宿主細胞表面ICAM-1表達的情況。 實驗結果：去除內毒素后的Cg3與對照組同等劑量的GST對HUVEC的作用結果無顯著差異，表明Cg3無明顯上調宿主細胞受體IC