惡性瘧原蟲動力素蛋白Pfdyn功能研究及感染惡性瘧原蟲紅細(xì)胞膜蛋白質(zhì)組檢測數(shù)據(jù)分析.pdf

1、惡性瘧原蟲Pfdyn是本實(shí)驗(yàn)篩選出的新蟲源基因,前期工作證明對瘧原蟲的生存至關(guān)重要.為了更深入地了解其功能,本文在原核系統(tǒng)中表達(dá)了Pfdyn基因的不同結(jié)構(gòu)域,著重觀察了編碼蛋白中特異性的C末端區(qū)的功能.免疫新西蘭大白兔后獲得抗原特異性的抗體,對惡性瘧紅內(nèi)期不同發(fā)育階段的表達(dá)進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)Pfdyn僅在紅內(nèi)期的裂殖體成熟期表達(dá).對不同流行區(qū)惡性瘧原蟲分離株P(guān)fdyn部分內(nèi)含子及外顯子測序,結(jié)果表明外顯子編碼區(qū)高度保守,僅有部分點(diǎn)突變,內(nèi)含

2、子有部分片斷缺失或移碼突變.根據(jù)同源性分析提示,本文又從鼠瘧約氏瘧原蟲的cDNA克隆到全長的Pydyn基因,蛋白序列比較證明與惡性瘧原蟲Pfdyn蛋白有75%的同源性.IFA結(jié)果表明Pydyn在紅內(nèi)期、蚊胃期及唾液腺子孢子期均有表達(dá).網(wǎng)上數(shù)據(jù)顯示Pfdyn在配子體期也有轉(zhuǎn)錄.提示Pfdyn在瘧原蟲生活周期的多個階段都發(fā)揮作用,在不同的種屬之間具有保守性.本文利用已知惡性瘧原蟲蛋白Pf39,PfERD2,PfGRP與Pfdyn進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)進(jìn)

3、行免疫熒光共定位,經(jīng)IFA實(shí)驗(yàn)顯示Pfdyn與以上蛋白部分重疊,表明Pfdyn除存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體外,還可定位于其它部位.用免疫電鏡檢測,發(fā)現(xiàn)金顆粒在吞飲小泡,食物泡(相當(dāng)于其它真核生物的溶酶體)、質(zhì)膜、分泌小泡上均有存在,進(jìn)一步提示Pfdyn功能的多樣性.本文隨后對本實(shí)驗(yàn)室利用生物素鏈親合素-LC/MS/MS方法批量尋找感染紅細(xì)胞外膜表面蛋白的檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行了深入的分析,全面評價了感染紅細(xì)胞生物膜通透性改變對生物素衍生物標(biāo)記-LC/

4、MS/MS檢測結(jié)果的影響,證明在感染瘧原蟲后,紅細(xì)胞膜的通透性比正常狀態(tài)時大大增高,從而明顯影響生物素鏈霉親和素-LC/MS/MS檢測的結(jié)果,并對導(dǎo)致這些變化的分子機(jī)理進(jìn)行了全面的分析.在此基礎(chǔ)上,發(fā)現(xiàn)利用這一特性,能夠?qū)⒈緦?shí)驗(yàn)室用蛋白質(zhì)組技術(shù)所獲得的59個瘧原蟲編碼候選蛋白定位于瘧原蟲細(xì)胞膜外至感染紅細(xì)胞膜內(nèi)這個特定的區(qū)域.由于存在于這一區(qū)域內(nèi)的蟲源性蛋白對抗瘧藥物的篩選和瘧疾疫苗的研制均有重要意義,本文工作為進(jìn)一步深入進(jìn)行紅細(xì)胞內(nèi)期