云南惡性瘧原蟲(chóng)雙氫青蒿素抗性克隆株的篩選.pdf

1、1、目的 運(yùn)用體外培養(yǎng)法對(duì)惡性瘧原蟲(chóng)抗雙氫青蒿素蟲(chóng)株進(jìn)行體外連續(xù)培養(yǎng)，待其達(dá)到適宜感染率后進(jìn)行同步化處理，然后利用有限稀釋法對(duì)蟲(chóng)株進(jìn)行有限稀釋并體外克隆，采用體外微量測(cè)定法對(duì)克隆蟲(chóng)株的雙氫青蒿素、青蒿素、氯喹的體外敏感性的生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定，篩選并建立云南省惡性瘧原蟲(chóng)抗雙氫青蒿素蟲(chóng)株的克隆品系，為惡性瘧原蟲(chóng)青蒿素類抗瘧藥抗藥性研究奠定基礎(chǔ)。 2、方法 （1）惡性瘧原蟲(chóng)體外連續(xù)培養(yǎng)：Trager瘧原蟲(chóng)體外培養(yǎng)法將惡

2、性瘧原蟲(chóng)抗雙氫青蒿素蟲(chóng)株進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)。 （2）有限稀釋：采用有限稀釋法對(duì)正在培養(yǎng)的惡性瘧原蟲(chóng)抗性株進(jìn)行四次稀釋、一步處理，即每次稀釋以50%“O”型人紅細(xì)胞懸液1ml稀釋上一稀釋度的原蟲(chóng)血，取最后稀釋濃度的含蟲(chóng)血22ul，加50%新鮮“O”型人紅細(xì)胞懸液、1640完全培養(yǎng)液將其調(diào)整為含1%壓積紅細(xì)胞、每100ul含0．2蟲(chóng)的含蟲(chóng)血，按每孔0．2蟲(chóng)加樣于96孔微量細(xì)胞培養(yǎng)板，放入37℃、5%CO2的蠟燭缸中培養(yǎng)，進(jìn)行原蟲(chóng)體外克隆。