RNA干擾沉默視網(wǎng)膜母細胞瘤SO-RB-,50-細胞中survivin基因表達的研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文RNA干擾沉默視網(wǎng)膜母細胞瘤SORB細胞中survivin基因表達的研究姓名：聶莉申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：李永平20060501RNA干擾沉默視|刊膜母細胞癰SORB50細胞葉1survivin摧聞表達的研究聶莉顫十學(xué)位論文術(shù)，它通過將雙鏈RNA導(dǎo)入細胞，在Dicer酶的作用下裂解為19～29個核苷酸的小干擾RNA，特異性地降解相應(yīng)序列地mRNA，導(dǎo)致特定基因轉(zhuǎn)錄后沉默。目前RNA干擾已應(yīng)用于基因敲除

2、、基因表達調(diào)控、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因治療等方面的研究，與上述抑制基因表達的研究方法相比，RNA干擾能夠更加高效特異地進行特定基因的抑制。目前國內(nèi)外相繼有學(xué)者應(yīng)用siRNA技術(shù)來抑制腫瘤細胞中survivin基因表達的報道，我們查閱了文獻但尚未見報道RNA干擾沉默視網(wǎng)膜母細胞瘤中survivin基因表達的研究，故本實驗合成了針對survJvYz#j￡因的RNA干擾雙鏈，觀察其沉默視網(wǎng)膜母細胞瘤細胞株SORB。。中凋亡抑制因子survivin表達

3、的效果，并進一步在細胞學(xué)水平上研究SUFV[vinX|J細胞增值和誘導(dǎo)凋亡方面的影響及其可能的作用機制。方法首先應(yīng)用細胞免疫組織化學(xué)的方法驗證survivin在視網(wǎng)膜母細胞瘤SO—l‰，細胞q1表達，然后根據(jù)人survivin基因的mRNA序列，設(shè)計針對survivin基因的siRNA序列和對survivin基因無抑制作用的陰性對照siRNA序列，利用體外化學(xué)合成法合成。為了防止綠色熒光FAM標記后影響survivinsiRNA對靶基因

4、的沉默效果，故將FAM標記在陰性對照siRNA的5’末端。首先將FAM標記的陰性對照siRNA與轉(zhuǎn)染試劑以不同的比例轉(zhuǎn)入sO—RB；。細胞，分別在轉(zhuǎn)染24h、48h后在熒光顯微鏡下計數(shù)發(fā)綠色熒光的細胞占總的細胞的比例，計算轉(zhuǎn)染效率，從而篩選出轉(zhuǎn)染的最佳比例和時間，然后再以最佳比例將survivinsiRNA轉(zhuǎn)XSORB。。細胞，并設(shè)平行對照組。轉(zhuǎn)染24h后通過半定量RT—PeR和WesternBlot檢測其對SO—R‰細胞中surviv