黃芩湯對潰瘍性結腸炎小鼠腸道m(xù)iR-21表達及JNK-AP-1信號通路的影響.pdf

1、[目的]：
　　1.觀察DSS誘導的急性潰瘍性結腸炎小鼠結腸組織中miR-21的表達情況、JNK/AP-1通路的激活情況及黃芩湯的干預作用。
　　2.研究潰瘍性結腸炎中JNK/AP-1信號通路對miR-21表達的作用。
　　3.從JNK/AP-1信號通路角度探討黃芩湯下調miR-21表達的機制。
　　[方法]：
　　1.急性潰瘍性結腸炎(UC)小鼠模型的建立及給藥
　　56只C57BL/6小鼠隨機分為

2、7組，每組8只:正常組、模型組、DMSO組、黃芩湯組、美沙拉秦組、SP600125組（SP組）、SP600125+黃芩湯組（SP+黃芩湯組）。除正常組外，其余各組小鼠通過自由飲用2.5％葡聚糖硫酸鈉(Dextran SulfateSodium，DSS)水溶液6天建立急性潰瘍性結腸炎模型。黃芩湯組、美沙拉秦組、SP+黃芩湯組分別于造模第四天灌胃給予黃芩湯(10g/kg)、美沙拉秦(0.6g/kg)、黃芩湯(10g/kg)，一天兩次，直至第

3、10天;DMSO組、SP組和SP+黃芩湯組分別于造模前2小時腹腔注射DMSO（SP600125溶媒，10％）、SP600125（JNK通路抑制劑，20mg/kg）、SP600125（20mg/kg），每天一次，直至第10天。于第11天處死所有小鼠，取小鼠結腸組織。
　　2.檢測方法及指標
　　觀察小鼠一般情況，進行疾病活動度評分;取材后測量各組小鼠結腸長度，對結腸組織HE染色后進行組織病理學評分;采用Western Blot

4、法檢測小鼠結腸組織p-JNK、p-c-Jun(Ser73)、p-c-Jun(Ser63)的表達情況;實時定量PCR檢測小鼠結腸miR-21、JNK1、JNK2、c-Jun mRNA的表達情況;ChIP實驗分析c-Jun蛋白與miR-21啟動子AP-1位點的結合能力。
　　[結果]：
　　1.與正常組相比，模型組小鼠一般情況較差，DAI評分升高，結腸縮短，病理學評分升高，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。黃芩湯組、美沙拉秦組、SP

5、組和SP+黃芩湯組的一般情況、小鼠DAI評分、結腸長度、病理學評分均好于模型組(P＜0.05)。
　　2.Western Blot結果顯示:與正常組相比，模型組p-JNK、p-c-Jun(Ser73)、p-c-Jun(Ser63)蛋白表達升高，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);黃芩湯組、美沙拉秦組、SP組和SP+黃芩湯組的p-JNK、p-c-Jun(Ser73)蛋白表達較模型組降低，除美沙拉秦組p-c-Jun(Ser73)外均有統(tǒng)計學

6、意義(P＜0.01);而黃芩湯組、美沙拉秦組、SP組和SP+黃芩湯組的p-c-Jun(Ser63)蛋白表達較模型組降低，其中SP組、SP+黃芩湯組有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　3.實時定量PCR結果顯示:與正常組相比，模型組miR-21的表達升高，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，給予黃芩湯、美沙拉秦、SP和SP+黃芩湯干預后miR-21表達降低，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　4.實時定量PCR結果顯示:與正常組相比

7、，模型組JNK1、JNK2的表達降低，c-Jun的表達升高，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);與模型組相比，黃芩湯組、美沙拉秦組JNK1、JNK2表達增加，c-Jun的表達減少;SP組JNK1、JNK2和c-Jun的表達降低，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01); SP+黃芩湯組JNK1、c-Jun表達升高，JNK2表達降低，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　5.ChIP實驗結果顯示:轉錄因子c-Jun不與miR-21啟動子區(qū)域AP-1位點

8、結合。
　　[結論]：
　　1.黃芩湯可緩解DSS誘導的急性UC癥狀。
　　2.黃芩湯緩解UC癥狀可能與下調結腸組織miR-21表達及抑制JNK/AP-1信號通路激活有關。
　　3.UC中JNK信號通路不能直接通過下游轉錄因子c-Jun調節(jié)miR-21的表達，可能通過c-Jun家族的其他轉錄因子與c-Fos家族的轉錄因子形成異源二聚體，作用于miR-21啟動子區(qū)域AP-1結合位點上調節(jié)miR-21的表達，具體調節(jié)