重組CS1聯合HBsAg治療性乙型肝炎疫苗的研究.pdf

1、慢性乙型肝炎是一種嚴重危害人類健康的全球性疾病，目前尚無有效的藥物進行治療，疫苗仍然是預防乙肝的重要手段。目前普遍使用的乙型肝炎疫苗是以乙肝表面抗原蛋白為基礎的，此類疫苗可誘導人體產生保護性抗體，從而起到預防乙型肝炎的作用。但此類疫苗最大的缺點是不能誘導有效的細胞免疫，而細胞免疫在清除細胞內病毒，以及打破慢性乙肝患者持續(xù)的免疫耐受狀態(tài)具有極其重要的作用。 本研究對由中國預防醫(yī)學科學院病毒學研究所構建的HBV(中國流行株)核心抗原

2、與PreS1融合重組質粒(CS1)進行了轉導、培養(yǎng)、誘導表達，并對誘導表達的條件進行了優(yōu)化。通過表達產物的SDS-PAGE電泳、western檢測和抗原性鑒定，確定該蛋白理化、生物學特性與理論結果一致。對表達的HBV融合蛋白CS1使用DEAE-Sepharose4FF離子交換和Sephadex-G75分子篩進行了兩步層析純化得到了純度達到98％以上，抗原性較好，免疫原性較強的蛋白。 將純化后的HBV融合蛋白CS1與蘭州生物制品研

3、究所疫苗三室生產的CHO-乙型肝炎表面抗原(HBsAg)聯合，以不同劑量免疫BALB/C小鼠，并用兩疫苗單獨免疫作為參照，以生理鹽水作為對照。免疫后于不同時間采血ELISA方法檢測小鼠血清抗體；制備脾臟單個核細胞(MNC)，做MTT檢測；用血清抗體效價和淋巴細胞增殖情況兩種標準確定最優(yōu)劑量和最佳免疫程序。用合適劑量的HBcAg與HBsAg聯合(CS1+S)后，以終濃度為1mg/mlAl(OH)3作為佐劑與不含佐劑的CS1+S抗原組同時免

4、疫BALB/C小鼠，并用兩種疫苗單獨免疫(含和不含Al(0H)3)作為參照，以生理鹽水作為對照。免疫后用ELISA方法測定抗體產生的滴度；制備脾臟單個核細胞(MNC)，ELISA法檢測細胞因子IFN-γ分泌水平；應用流式細胞儀分析T細胞亞群；最后應用DTH試驗檢測抗原引起的BALB/C小鼠遲發(fā)型超敏反應。最后的結果顯示HBcAg與HBsAg聯合免疫小鼠產生的IFN-γ量與二者單獨免疫相比有顯著性差異(P＜0.05)，CD3+CD4+水平

5、與后者相比顯著增高(P＜0.05)；含Al(OH)3佐劑的聯合疫苗CD8+水平比空白對照組有顯著性差異(P＜0.05)；聯合疫苗產生的保護性抗體anti-HBs與2倍劑量的HBsAg單獨免疫相比無顯著性差異(P＞0.05)；含Al(OH)3佐劑與不含佐劑的抗原免疫效果差異不顯著(P＞0.05)。 總之，本課題工作表明，用CS1與HBsAg聯合，具有良好的體液免疫與細胞免疫效果，有助于清除HBV病毒并有希望打破HBV感染引起的慢性