EAN中促紅細(xì)胞生成素是炎癥誘導(dǎo)的內(nèi)源性保護(hù)分子.pdf

1、炎癥是機(jī)體的一種保護(hù)性反應(yīng)，在防御和清除體內(nèi)外各種致病因素上發(fā)揮了重要作用，但是持續(xù)過強(qiáng)的炎癥反應(yīng)也會造成機(jī)體的組織細(xì)胞損傷。研究已經(jīng)證明，炎癥性損傷參與機(jī)體多種病理生理過程，影響了多種的疾病發(fā)生發(fā)展。由于炎癥同時具有組織損傷功能，機(jī)體也存在炎癥反應(yīng)誘導(dǎo)的內(nèi)源性反饋機(jī)制，以調(diào)控和限制炎癥在合理水平。研究闡明這種內(nèi)源性的炎癥調(diào)控機(jī)制對于炎癥反應(yīng)的調(diào)控有重要的理論和實際意義。
　　 促紅細(xì)胞生成素(EPO)是主要由腎臟合成并分泌的造

2、血因子，是體內(nèi)最重要的促造血激素。EPO的作用是受體依賴的，且EPO的促造血作用由表達(dá)在造血祖細(xì)胞上的EPO受體(EPOR)的同源二聚體化所介導(dǎo)。近年來研究發(fā)現(xiàn)，EPOR不僅表達(dá)在造血系統(tǒng)，而且表達(dá)在許多非造血系統(tǒng)如神經(jīng)系統(tǒng)，且神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生損傷后EPO/EPOR的表達(dá)明顯增加，這些發(fā)現(xiàn)提示EPO具有除造血以外的其他生物學(xué)活性。最近的研究證實，EPO在無論在體內(nèi)還是體外都具有強(qiáng)大的組織和細(xì)胞保護(hù)作用，不同于EPO的造血功能，介導(dǎo)細(xì)胞保護(hù)作

3、用的受體是EPOR和commonβ鏈組成的異源二聚體。更有趣的是，目前在炎癥細(xì)胞如巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞表面也都發(fā)現(xiàn)有EPOR的表達(dá)，這一發(fā)現(xiàn)直接提示我們EPO可能影響炎癥細(xì)胞功能，具有炎癥調(diào)控功能。多種研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外源性給予EPO具有炎癥調(diào)控功能，并且EPO及其受體表達(dá)受到炎癥因子等的調(diào)控。據(jù)此，我們推測EPO可能是一種由炎癥所誘導(dǎo)的內(nèi)源性細(xì)胞保護(hù)和炎癥調(diào)控的分子，是機(jī)體炎癥調(diào)控的內(nèi)源性機(jī)制之一。因此我們以大鼠實驗性自身免疫性神經(jīng)炎(EA

4、N)為模型進(jìn)行了研究。
　　 大鼠實驗性自身免疫性神經(jīng)炎(EAN)是一種CD4+T細(xì)胞為主介導(dǎo)的外周神經(jīng)自身免疫性脫髓鞘性炎癥模型。EAN發(fā)病過程具有單向性和自限性的特點，在疾病前期，EAN進(jìn)展達(dá)到疾病高峰期，炎癥性損傷最為嚴(yán)重；但在疾病后期，各種內(nèi)源性的保護(hù)機(jī)制參與了炎癥的消退，從而促使疾病得以自發(fā)康復(fù)。這一重要特點使其成為研究炎癥內(nèi)源性反饋調(diào)節(jié)機(jī)制的良好模型。其次，參與EAN炎癥反應(yīng)的細(xì)胞較為明確，除CD4+T淋巴細(xì)胞外，巨

5、噬細(xì)胞和雪旺氏細(xì)胞也參與其中并發(fā)揮重要的作用，這對我們研究調(diào)控分子對各炎癥細(xì)胞的影響提供了很大的便利。
　　 本研究中我們以大鼠EAN為炎癥模型，研究了EAN誘導(dǎo)炎癥中內(nèi)源性EPO的表達(dá)，體外EPO對的炎癥細(xì)胞功能的影響和對雪旺氏細(xì)胞的保護(hù)，以及外源性EPO對EAN的治療作用和可能機(jī)制。
　　 具體而言，在第一部分實驗中，我們建立了大鼠EAN炎癥模型，并通過Real-timePCR和免疫組化的方法檢測了EAN外周神經(jīng)和淋

6、巴結(jié)中EPO和EPOR的表達(dá)情況。我們發(fā)現(xiàn)EPO/EPOR在EAN外周神經(jīng)和淋巴結(jié)中的表達(dá)是增加的，而且與EAN炎癥的嚴(yán)重程度呈平行關(guān)系，提示炎癥誘導(dǎo)了內(nèi)源性EPO的表達(dá)，內(nèi)源性EPO的表達(dá)可能是炎癥的一種反饋性調(diào)控機(jī)制。
　　 在第二部分實驗中，我們研究了體外EPO對巨噬細(xì)胞、雪旺氏細(xì)胞和淋巴細(xì)胞在細(xì)胞增殖、凋亡、炎癥因子分泌等方面的影響，我們發(fā)現(xiàn)對于雪旺氏細(xì)胞，EPO促進(jìn)其增殖和髓鞘分泌、減少其凋亡和炎癥因子的表達(dá)；對于巨噬

7、細(xì)胞，EPO抑制其炎癥因子的分泌，促進(jìn)其吞噬功能；對于淋巴細(xì)胞，EPO抑制了其激活后的增殖反應(yīng)。這些體外實驗結(jié)果表明EPO具有細(xì)胞保護(hù)和炎癥調(diào)控功能，提示我們外源性EPO在EAN動物體內(nèi)也可能有相似的組織保護(hù)和炎癥調(diào)控功能。
　　 在第三部分實驗中，我們使用外源性EPO對EAN大鼠進(jìn)行了治療，發(fā)現(xiàn)EPO顯著縮短了EAN病程、減低了神經(jīng)運(yùn)動功能障礙嚴(yán)重程度。外周神經(jīng)免疫組化和定量PCR結(jié)果顯示EPO減少了外周神經(jīng)的脫髓鞘、抑制了炎

8、癥細(xì)胞的浸潤，減少了促炎因子的表達(dá)。脾臟流式分析結(jié)果表明EPO顯著抑制了脾臟PBMC中CD4+T細(xì)胞比例，并且抑制了Th1型細(xì)胞，促進(jìn)了Treg型細(xì)胞的分化。淋巴結(jié)定量PCR分析結(jié)果提示EPO抑制了淋巴結(jié)中Th1/Th17型細(xì)胞的分化，促進(jìn)了Treg型細(xì)胞的分化。這些結(jié)果表明EPO在體內(nèi)確實能夠發(fā)揮強(qiáng)大的組織保護(hù)和炎癥調(diào)控功能。
　　 上述研究表明炎癥誘導(dǎo)了內(nèi)源性EPO的表達(dá)，EPO是炎癥誘導(dǎo)的內(nèi)源性有細(xì)胞保護(hù)和炎癥調(diào)控分子，是