Matrilin-2與肝卵圓細(xì)胞增殖關(guān)系及維生素K2對(duì)其影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、通過(guò)建立大鼠肝卵圓細(xì)胞(hepatic oval cells，HOC)增殖模型，探討matrilin-2對(duì)HOC增殖分化調(diào)控作用及維生素K2(Vitamin K2，VK2)對(duì)其的影響。進(jìn)一步闡明肝內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)成分在維持肝臟正常結(jié)構(gòu)和細(xì)胞的增殖、分化、遷移方面具有的重要作用。在利用藥物(如VK2)促進(jìn)內(nèi)源性成體肝干細(xì)胞增殖、分化，加速肝再生，防治肝功能損害或衰竭等方面提供了一定的理論和應(yīng)

2、用依據(jù)。
　　 [方法]
　　 將健康SPF級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為五組：A.2-乙酰氨基芴組(2AAF組)、B.切肝組(HP組)、C.VK2+切肝組(VK2/HP組)、D.2AAF+切肝組(2AAF/HP組)、E.2AAF+VK2+切肝組(2AAF+VK2/HP組)，每組30只。各組分別給藥后按改良的Solt-Farber大鼠模型構(gòu)建方法將肝臟切除三分之二。于切肝術(shù)后第4、8、12、16、20天，共5個(gè)時(shí)間點(diǎn)手術(shù)取得大鼠

3、肝臟，每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)5只，分別用甲醛固定及液氮保存，用于制作病理切片、免疫組織化學(xué)染色，以觀察HOC增殖情況，用熒光定量PCR方法檢測(cè)各組肝組織中matrilin-2 mRNA的表達(dá)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 [結(jié)果]
　　 1.造模后大鼠一般情況：2AAF/HP組：術(shù)后活動(dòng)減少、精神差，隨后出現(xiàn)毛松無(wú)光澤、尿黃、腹水，4只大鼠死亡，死亡率13.3％，而2AAF+VK2/HP組無(wú)明顯被毛松亂、尿黃，無(wú)腹水，2只大鼠死亡，

4、死亡率6.7％。其它各組無(wú)特殊。
　　 2.形態(tài)學(xué)與組織學(xué)變化：2AAF/HP組：肝臟代償性增大、充血、肝緣圓鈍，表面及切面可見(jiàn)散在圓形點(diǎn)狀病灶、不凸出肝表面，部分見(jiàn)出血點(diǎn)。鏡下肝細(xì)胞水腫、肝索結(jié)構(gòu)紊亂，匯管增生反應(yīng)，HOC呈簇狀分布，隨時(shí)間推移從匯管區(qū)向小葉中央遷移，術(shù)后20天結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)。2AAF+VK2/HP組：未見(jiàn)出血點(diǎn)及點(diǎn)狀病灶，無(wú)腹水，匯管區(qū)增生更明顯，分化、遷移加快，12天后已基本恢復(fù)正常。兩組相同時(shí)間點(diǎn)OV-6陽(yáng)

5、性細(xì)胞計(jì)數(shù)2AAF+VK2/HP組較多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，同組內(nèi)第4、8天與12天、第16、20天與12天差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其余各組HOC增殖不明顯，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 3.熒光定量PCR檢測(cè)matrilin-2 mRNA表達(dá)情況：各組均有一定量的表達(dá)，但以2AAF/HP組及2AAF+VK2/HP組最為明顯，兩組術(shù)后第4天、第8天matrilin-2mRNA表達(dá)以2AAF+VK2

6、/HP組較多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而從第12天起，兩組表達(dá)量相當(dāng)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，且高峰值相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。同組內(nèi)第4、8天與12天、第16、20天與12天差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 4.將HOC計(jì)數(shù)與matrilin-2 mRNA表達(dá)量行線性相關(guān)分析：2AAF/HP組相關(guān)系數(shù)r=0.79，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；2AAF+VK2/HP組相關(guān)系數(shù)r=0.6

7、8，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.采用Solt-Farber方法成功建立了HOC增殖的2AAF/PH動(dòng)物模型。
　　 2.Matrilin-2 mRNA的表達(dá)與HOC增殖分化呈正相關(guān)關(guān)系，表明matrilin-2對(duì)HOC具有調(diào)控作用。
　　 3.維生素K2可通過(guò)增強(qiáng)Matrilin-2 mRNA表達(dá)，促進(jìn)HOC增殖，加速肝臟再生，對(duì)肝臟有一定保護(hù)作用。
　　 4.闡明肝