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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
通過(guò)建立大鼠肝卵圓細(xì)胞(hepatic oval cells,HOC)增殖介導(dǎo)的肝再生模型,探討不同劑量維生素K2(Vitamin K2,VK2)對(duì)造模大鼠肝切除術(shù)后肝再生狀態(tài)(肝重恢復(fù))及肝功能恢復(fù)的影響,篩選出用于大鼠實(shí)驗(yàn)研究促進(jìn)肝再生及肝功能恢復(fù)的最佳劑量維生素K2。為在臨床上應(yīng)用藥物VK2促進(jìn)HOC增殖介導(dǎo)的肝再生修復(fù)肝損傷、防治肝功能損害或衰竭等方面提供一定的理論和應(yīng)用依據(jù)。
方法:
實(shí)驗(yàn)
2、組分為5組:1)2AAF+VLVK2/PH組(灌胃2AAF+極低劑量維生素K2(10mg/kg)+肝2/3切除組)、2)2AAF+LVK2/PH(灌胃2AAF+低劑量維生素K2(15mg/kg)+肝2/3切除組)、3)2AAF+MVK2/PH(灌胃2AAF+中劑量維生素K2(20mg/kg)+肝2/3切除組)、4)2AAF+HVK2/PH(灌胃2AAF+高劑量維生素K2(25 mg/kg)+肝2/3切除組)、5)2AAF+VHVK2/P
3、H(灌胃2AAF+極高劑量維生素K2(30 mg/kg)+肝2/3切除組)。將灌胃2AAF+肝2/3切除組(2AAF/PH)和單純肝2/3切除組(PH)設(shè)為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組每次灌2AAF后約20分鐘,給予五個(gè)不同劑量的維生素K2灌胃。每組30只SD雄性大鼠,分別于術(shù)后第4、8、12、16、20天5個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死大鼠獲取相應(yīng)標(biāo)本,每個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死5只大鼠。通過(guò)計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)肝再生度和再生指數(shù),同時(shí)各時(shí)間點(diǎn)抽血檢測(cè)AST、ALT、白蛋白的動(dòng)態(tài)變化
4、,觀察大鼠肝再生過(guò)程中肝臟功能恢復(fù)情況,并制作病理切片觀察肝損傷修復(fù)的組織學(xué)變化情況,統(tǒng)計(jì)分析維生素K2對(duì)肝再生狀態(tài)及肝功能恢復(fù)的影響,并篩選促進(jìn)肝再生作用及肝損傷修復(fù)最佳的維生素K2劑量。
結(jié)果:
1.造模后大鼠一般情況:PH組:大鼠2/3切肝手術(shù)后活動(dòng)減少、飲食下降,術(shù)后第3天基本恢復(fù)正常,死亡率為零。2AAF/PH組:術(shù)后活動(dòng)減少,精神差,隨后出現(xiàn)毛松無(wú)光澤、尿黃、部分大鼠出現(xiàn)腹水,食欲明顯下降,一般情況差,反
5、應(yīng)遲鈍,體重下降,當(dāng)一周后停止灌2AAF后,大鼠精神好轉(zhuǎn),體重增加,飲食恢復(fù)正常,全組共4只大鼠死亡,死亡率13.3%。2AAF+VK2/PH組(各實(shí)驗(yàn)組):術(shù)后活動(dòng)減少,飲食下降,精神較2AAF/PH組好,無(wú)明顯被毛松亂、尿黃,無(wú)腹水,停用2AAF后大鼠狀態(tài)好轉(zhuǎn),體重增加,飲食恢復(fù)正常時(shí)間短,每實(shí)驗(yàn)組共有2只大鼠死亡,死亡率6.7%。
2.各組肝再生度及肝再生指數(shù)情況:各組肝再生度、肝再生指數(shù)均自第4天逐漸升高并達(dá)到高峰而后
6、穩(wěn)定;實(shí)驗(yàn)組(2AAF+VLVK2/PH、2AAF+LVK2/PH、2AAF+MVK2/PH、2AAF+HVK2/PH、2AAF+VHVK2/PH)肝再生度、肝再生指數(shù)自第4天逐漸升高,高峰則前移至16天,而后穩(wěn)定,各實(shí)驗(yàn)組同組16天與4、8、12天比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),20與16天比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);在4、8、12、16天同一時(shí)間點(diǎn)內(nèi),各實(shí)驗(yàn)組肝再生度、肝再生指數(shù)均比對(duì)照組2AAF/PH組高,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)
7、意義(P<0.05);在4、8、12天同一時(shí)間點(diǎn)內(nèi),2AAF+MVK2/PH組肝再生度、肝再生指數(shù)比2AAF+VLVK2/PH、2AAF+LVK2/PH高,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而與2AAF+HVK2/PH、2AAF+VHVK2/PH比較時(shí)其差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
3.各組大鼠術(shù)后肝功能恢復(fù)情況:各組自術(shù)后第4天起ALT、AST均逐漸下降、白蛋白則逐漸升高,至第12天后ALT、AST及白蛋白均基本穩(wěn)定,
8、同組內(nèi)第4、8天與12天、第16、20天與12天差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在4、8天同一時(shí)間點(diǎn)內(nèi),各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組PH組、2AAF/PH組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),2AAF+MVK2/PH組ALT、AST及白蛋白均比2AAF+VLVK2/PH、2AAF+LVK2/PH高,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而與2AAF+HVK2/PH、2AAF+VHVK2/PH比較時(shí)其差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
4.大
9、鼠形態(tài)學(xué)與組織學(xué)變化:2AAF/PH組:肝臟代償性增大、充血、肝緣圓鈍,表面及切面可見(jiàn)散在圓形點(diǎn)狀病灶、不凸出肝表面,部分見(jiàn)出血點(diǎn)。鏡下肝細(xì)胞水腫、肝索結(jié)構(gòu)紊亂,匯管增生反應(yīng),HOC呈簇狀分布,隨時(shí)間推移從匯管區(qū)向小葉中央遷移,術(shù)后20天結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組2AAF/PH組比較:未見(jiàn)出血點(diǎn)及點(diǎn)狀病灶,無(wú)腹水,匯管區(qū)增生更明顯(以2AAF+MVK2/PH組最為明顯),遷移、分化加快,12天后已基本恢復(fù)正常。
結(jié)論:
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