化合物YZG-330和YZG-331對(duì)神經(jīng)元氯離子流動(dòng)的影響.pdf

1、目前臨床上使用的三代鎮(zhèn)靜催眠藥均作用于GABAA受體，使氯離子通道開(kāi)放，氯離子順濃度梯度從細(xì)胞流動(dòng)向細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞膜超極化，細(xì)胞興奮性下降，從而引起鎮(zhèn)靜催眠作用。其中，第一代鎮(zhèn)靜催眠藥巴比妥類(lèi)藥物作用于GABAA受體，使氯離子通道開(kāi)放的時(shí)間延長(zhǎng);第二代鎮(zhèn)靜催眠藥苯二氮口類(lèi)藥物作用于GABAA受體，使氯離子通道開(kāi)放的頻率增加;第三代鎮(zhèn)靜催眠藥非苯二氮口類(lèi)藥物作用于GABAA受體，使氯離子通道的開(kāi)放時(shí)間延長(zhǎng)，開(kāi)放頻率增加。
　　本實(shí)驗(yàn)室

2、前期研究發(fā)現(xiàn)化合物YZG-330和YZG-331對(duì)小鼠有鎮(zhèn)靜催眠作用，我們將觀察YZG-330和YZG-331對(duì)氯離子通道的影響。熒光染料MQAE與氯離子結(jié)合后熒光猝滅，將氯離子敏感的熒光染料MQAE載入細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞內(nèi)MQAE的熒光值的變化反映氯離子濃度的變化，可用于研究受試物對(duì)氯離子通道的影響。本研究分為兩部分:一、化合物YZG-330和YZG-331對(duì)原代培養(yǎng)的大鼠小腦顆粒神經(jīng)元氯離子流動(dòng)的影響。二、采用急性分離的小鼠大腦皮層細(xì)胞，

3、建立簡(jiǎn)便/快捷的細(xì)胞內(nèi)氯離子濃度的檢測(cè)方法，用于篩選氯離子通道開(kāi)放劑，并檢測(cè)陽(yáng)性藥以及YZG-330和YZG-331對(duì)急性分離的小鼠大腦皮層細(xì)胞氯離子內(nèi)流的影響。
　　一、化合物YZG-330和YZG-331對(duì)原代培養(yǎng)的大鼠小腦顆粒神經(jīng)元氯離子流動(dòng)的影響
　　本研究的目的是觀察具有鎮(zhèn)靜催眠作用的化合物YZG-330和YZG-331對(duì)原代培養(yǎng)的大鼠小腦顆粒神經(jīng)元氯離子流動(dòng)的影響。因?yàn)樾∧X顆粒神經(jīng)元表達(dá)GABAA受體的種類(lèi)較全，

4、數(shù)量較多。所以用小腦顆粒神經(jīng)元檢測(cè)氯離子的流動(dòng)。將原代培養(yǎng)的大鼠小腦顆粒神經(jīng)元荷載氯離子敏感的熒光染料MQAE，用熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)熒光值的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:GABA(3μM、10μM，30μM，100μM和300 uM)可劑量依賴(lài)性的引起原代培養(yǎng)的大鼠小腦顆粒神經(jīng)元氯離子流動(dòng)增加，YZG-330(3μM、10μM和30μM)引起氯離子流動(dòng)的強(qiáng)度分別為對(duì)照組的149％(P＜0.05)、152％(P＜0.05)和185％(P＜0.01

5、),YZG-331(3μM、10μM和30μM)引起氯離子流動(dòng)的強(qiáng)度分別為對(duì)照組的129％(P＜0.01)、147％(P＜0.01)和156％(P＜0.001)。GABAA受體的拮抗劑印防己毒素(100μM)，氟馬西尼(20μM)和荷包牡丹堿(50μM)對(duì)YZG-330引起的大鼠小腦顆粒細(xì)胞的氯離子流動(dòng)有抑制作用，GABAA受體的拮抗劑荷包牡丹堿(50μM)和氟馬西尼(20μM)對(duì)YZG-331引起的小腦顆粒細(xì)胞的氯離子流動(dòng)有抑制作用，

6、結(jié)果表明化合物YZG-330和YZG-331能引起大鼠小腦顆粒神經(jīng)元氯離子流動(dòng)，這種作用可能是通過(guò)GABAA受體介導(dǎo)的。
　　二、建立簡(jiǎn)便/快捷的氯離子通道開(kāi)放劑的篩選方法
　　本研究的目的是采用急性分離的小鼠大腦皮層細(xì)胞，建立簡(jiǎn)便/快捷的細(xì)胞內(nèi)氯離子濃度的檢測(cè)方法，用于篩選氯離子通道開(kāi)放劑，連續(xù)觀察GABA、戊巴比妥鈉、地西泮、氯硝西泮、YZG-330和YZG-331對(duì)急性分離的小鼠大腦皮層細(xì)胞氯離子內(nèi)流的影響。生理狀態(tài)下

7、，細(xì)胞外的氯離子濃度高于細(xì)胞內(nèi)，氯離子通道開(kāi)放后氯離子內(nèi)流。GABA和經(jīng)典的鎮(zhèn)靜催眠藥戊巴比妥鈉、地西泮以及氯硝西泮，均可劑量依賴(lài)性的使荷載了MQAE的細(xì)胞內(nèi)的熒光值降低;化合物YZG-330和YZG-331也能劑量依賴(lài)性的使細(xì)胞內(nèi)的熒光值降低，提示氯離子內(nèi)流增加。其中，GABA的藥效出現(xiàn)的最早，在給藥后即可使荷載了MQAE的小鼠大腦皮層細(xì)胞的熒光值迅速降低，戊巴比妥鈉的引起氯離子內(nèi)流的作用持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)，為40min?；衔颵ZG-33