GSK-3β在煙堿拮抗秋水仙堿誘導皮層神經元凋亡中的作用及機制研究.pdf

1、大腦皮層神經元凋亡在AD的發(fā)生中具有重要意義,采用抗神經元凋亡的藥物來阻止AD病程的發(fā)展是AD治療的新思路.大量流行病學研究表明,吸煙人群中AD等神經退行性疾病發(fā)病率較低低,實驗室研究也逐步證實,煙堿具有對抗多種誘導物引起的神經元凋亡的作用,因此,煙堿可能作為抗神經元凋亡的藥物應用于AD的治療.實驗選用新生24小時以內的SD大鼠乳鼠,分離大腦皮層神經元,原代培養(yǎng)至第六天,加0.1μmol/L的秋水仙堿處理至24小時可誘導神經元凋亡.相差

2、顯微鏡下,神經元胞體變小,神經突起及形成的網絡結構基本消失;熒光顯微鏡下,神經元細胞核出現(xiàn)核周邊濃集、核固縮和核碎裂等凋亡的形態(tài)學變化;LDH相對釋放量明顯增加.以不同濃度煙堿(0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L)預孵2小時,或10 μ mol/L煙堿預孵不同時間(0.5、1和2小時)后加入秋水仙堿,秋水仙堿引起的神經元形態(tài)變化逐漸改善;LDH相對釋放量逐漸下降,細胞凋亡率逐漸降低,在一定濃度范圍內煙堿對神經元的保護作

3、用具有劑量依賴性和時間依賴性.其中以10μmol/L煙堿預孵2小時的保護作用最強.煙堿濃度過高(100μmol/L)或預孵時間過長(4小時),神經元凋亡反而更明顯.進一步分析Akt與GSK-3β的關系發(fā)現(xiàn),當加入100ng/ml和200ng/ml的IGF-1處理,GSK-3β Ser<'9>的磷酸化水平分別升高為199±9.2％和212±11.5%,與Akt Ser<'473>的磷酸化水平變化一致;而在加入煙堿預孵前2小時分別加入5μm

4、ol/L、25μmol/L和50μmol/L的LY294002,GSK-3β Ser<'9>的磷酸化水平分別降至34±4.3%、30±3.1%、15±3.2%,也與Akt Ser<'473>的磷酸化水平變化一致,提示在煙堿拮抗秋水仙堿誘導皮層神經元凋亡中,GSK-3 β的激酶活性可被Akt調節(jié).綜上所述,GSK-3β和Akt參與了秋水仙堿誘導的皮層神經元凋亡,秋水仙堿可能通過抑制Akt,進而激活GSK-3β,最終誘導皮層神經元凋亡.相反